赵艳芝， 张冬梅， 于刚刚， 曾翔俊， 王红霞， 芦玲巧， 张立克， 王岩梅△

(1首都医科大学燕京医学院生理与病理生理教研室，北京101300;2首都医科大学基础医学院病理生理教研室，北京100069)

随着抗缺血/再灌注损伤(ischemic/reperfusion，I/R)心肌自身保护研究的不断深入，近年来提出了缺血后处理(ischemic postconditioning，IPo)的概念［1］。大量研究证实缺血后处理具有缩小心肌梗死范围［2］、减轻内皮功能损伤、抗再灌注心律失常、改善心肌代谢及收缩和舒张功能、减轻超微结构的破坏等心肌保护作用［3］，减轻细胞凋亡［4］。缺血后处理对心脏再灌注的干预发生在缺血后，比缺血预处理(ischemic preconditioning，IPc)有明显的临床应用优势，故后处理越来越受到医学界的广泛关注。但后处理通过怎样的机制减轻缺血/再灌注损伤?通过哪种细胞信号转导方式发挥保护作用?尚不明了。通过在体及离体实验我室前期工作已证明缺血后处理与细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统(cytochrome P450 2J3/epoxyeicosatrienoic acids，CYP2J3/EETs)上调密切相关［2，5］。鉴于 11，12 －EET具有抑制内皮细胞凋亡作用［6］，IPo是否通过上调CYP2J3/EETs系统，进而抑制心肌细胞凋亡而保护心肌?值得探讨。本工作通过观察干预内源性CYP2J3/EETs系统对缺氧后处理(hypoxia postconditioning，HPost)心肌细胞凋亡蛋白的影响，了解缺氧后处理上调CYP2J3/EETs系统后发挥心脏保护的可能作用途径。

材料和方法

1 材料

1.1 主要试剂 胰蛋白酶(Hyclone)、胶原酶Ⅰ、Ⅱ(Sigma)、丝裂霉素 C(Roche)、DMEM(Hyclone);环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids，EETs)纯品及空白对照(Sigma)、无水乙腈(Fisher Scientifid)、甲酸(Sigma－Aldrich Chemic GmbH，Riedstr)、N，N －diisopropylethy lamine(Sigam)、固相提取柱(Waster Corporation);caspase－3活性检测试剂盒(Roche)、Bradford蛋白浓度测定试剂盒(碧云天试剂公司)、caspase－3抗体(Santa Cruz)、Western blotting发光试剂盒(Pierce);DMSO(Sigma);细胞色素P450表氧化酶抑制剂6－(2－炔丙基氧苯基)己酸［6－(2－propargyloxyphenyl)hexanoic acid，PPOH］(Sigma);pcDNA3.12－CYP2J3质粒由本实验室构建。……