王建祥

（怀化市第一人民医院，湖南 怀化 418000）

盐酸平阳霉素以其对唇癌、齿龈癌、舌癌、鼻咽癌等颈部鳞癌所具有的特殊疗效，在临床越来越受到广大医师和患者的重视，其有关物质的含量和其产品质量及不良反应密切相关，但国内鲜有关于其有关物质的控制方法的报道，2005版药典标准也未见有有关物质的标准项设置[1]。我们采用梯度洗脱高效液相色谱法对盐酸平阳霉素粉针剂中平阳霉素的有关物质进行了检测研究，以期为生产过程中盐酸平阳霉素粉针剂质量控提供一种科学有效的方法，不断提高产品的生产质量，现将研究资料总结如下。

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪及工作站，液相色谱solution管理系统。紫外检测器，精密电子分析天平。

1.2 试剂

色谱级乙腈、甲醇、乙酸，分析纯级乙二胺四乙酸二钠、氨水、己烷磺酸钠，注射用水。

1.3 盐酸平阳霉素粉针剂

购于某医药公司，由国内某制药公司生产，批号为：20100801、20100802、20100803；规格为8mg每支，平阳霉素标准品。

1.4 方法

1.4.1 测定原理

采用面积归一化法原理进行测定。我们采用的检测器是紫外吸收检测器，根据朗伯一比耳定律，A（吸光度）=K（样品在检测波长下的摩尔吸光系数）b（吸收池的光程）c（样品的浓度），知道样品的吸光度、紫外检测器中吸收池的光程、K值后，就可以计算出样品的浓度c。在高效液相色谱仪和流动相系统中，可最终推导得出：Ai（溶质的色谱峰面积）f（计算机系统峰面积积分数值的单位）F（流动相的流量）=103kb c i（溶质的浓度）Vloop。在一台固定的高效液相色谱频谱仪和用固定检测方法的系统中，流动相流量、溶质的摩尔吸光系数、紫外检测仪吸收池光程及定量进样管的体积是已知的或者可以进行准确测定的，所以，采用上述的公式，只要知道样品的色谱峰面积，样品的浓度就可以计算出来。

1.4.2 测定方法

①流动相配制：流动相A的配制：分别称取分析纯己烷磺酸钠37.695g、分析纯乙二胺四乙酸二钠18.645g，取0.08M乙酸溶液4500mL，溶解已称好的己烷磺酸钠和乙二胺四乙酸二钠，充分震摇使充分溶解后，定容至500mL，用氨溶液调节pH值4.1～4.3即得流动相A；流动相B的配制：取色谱级的甲醇和已晴以70∶30的比例混合均匀即得流动相B。②色谱条件：C18（4.6mm ×150mm×5μm），检测波长设定为254nm，柱温设定为30℃，流动相洗脱程序：流动相A和流动相B按照线性梯度洗脱程序进行设置（0～15min：70%A，30%B，流速1.0mL/min；15～35min：68%A，32%B，流速1.0mL/min；35～36min：60%A，40%B，流速1.0mL/min；36～40min：70%A，30%B，流速1.0mL/min），每针进样量20μL，检测时间40min。③平阳霉素标准液制备：检查平阳霉素标准品瓶签上标示的品名、纯度等正确，标准品无启封现象，打开标准品目测标准品应无结潮现象，于电子精密分析天平上采用取出法称取4mg平阳霉素标准品于2mL洁净干燥的容量瓶中，用注射用水溶解，经超声波超声溶解5min后，定容至2mL，作为标准液备用。④制备样品供试液：取盐酸平阳霉素粉针剂（批号20100801、20100802、20100803）各1支，分别用注射用水溶解，制成2mg/mL的溶液，充分震摇使充分溶解，写好标签并仔细贴在容量瓶身上，作为供试品溶液。⑤绘制标准曲线：将配置好的平阳霉素对照液用注射用水稀释，分别对原液稀释2倍、4倍、10倍、20倍、40倍、100倍、200、2000倍，分别用高效液相色谱仪测定稀释后的不同浓度的对照液的峰面积，每个样品的进样量为20μL，以不同浓度对照液的峰面积作为纵坐标，以对应的平阳霉素对照品浓度作为横坐标，得到平阳霉素的线性回归方程。⑥样品的测定：将已配制好的样品取出，按照制作回归方程的色谱条件进行测定，每次进样量为20μL，测各样品的峰面积，采用面积归一化法分别计算3个样品中盐酸平阳霉素相关物质的含量。

2 结 果

2.1 盐酸平阳霉素在浓度1～1000μg/mL范围内时，峰面积和浓度线性关系为A=8133.6C-9453.4，r=0.9999。表明供试液浓度在该范围内与面积呈良好的线性关系。

2.2 三批产品的盐酸平阳霉素有关物质的含量统计见表1。

表1 三批产品的盐酸平阳霉素有关物质的含量

3 讨 论

盐酸平阳霉素又被称作盐酸博莱霉素，平阳链霉菌在发酵过程中产生了多种平阳霉素组分，通过分离精制这些组分，得到一种化学名为N/-3-（4-氨基丁基）氨基丙基博莱霉素酰胺盐酸盐，即为盐酸平阳霉素。盐酸平阳霉素具有广谱抗癌效果，尤其以颈部鳞癌效果明显，其抗肿瘤活性强、疗程短、不良反应轻微，较少出现对造血和免疫功能的损害。因其具有的上述优点，在临床受到了广大医师和患者的青睐。盐酸平阳霉素性质不稳定，在常温下易分解，盐酸平阳霉素冻干粉针剂的出现对这一问题有所缓解。盐酸平阳霉素的有关物质含量和其产品质量、临床不良反应等密切相关，但国内相关的研究资料比较少，本组研究资料在参照日本、美国、英国[2-4]相关标准的基础上，对盐酸平阳霉素的有关物质测定方法做了初步的探析，以期为该产品的生产质量控制、稳定性考察、临床使用等提供一定的参考意义。通过实验研究显示，采用梯度洗脱高效液相色谱法进行盐酸平阳霉素有关物质的检测，在1～1000μg/mL含量范围内峰面积和浓度线性关系良好，可以作为生产过程中盐酸平阳霉素含量和有关物质控制的有效方法。

[1]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.

[2]Society of Japanese Pharmacopoeia.The Japanese Pharmacopoeia[S].Tokyo：Society of Japanese Pharmacopoeia,2008：370.

[3]The British Phanmcopoeia Comn-fissioll.The British F,Pharmacopoeia[S].London：The Stationary Office,2008：292.

[4]The United States Pharmacopoeia Commission Inc.The United Slates Pharmacopoeia[S].Board of Trustees,2007：1541.