李存芝 黄雪松 唐书泽 李琳 张广文 胡长鹰

(1.暨南大学 食品科学与工程系，广东 广州510632;2.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640)

亲和－膜过滤技术也称作亲和错流过滤，由Adamsi-Medda等［1］于 1981年提出，它将水溶性或非水溶性高分子亲和载体与目标蛋白进行特异性可逆反应，然后用膜进行错流过滤，兼具生物亲和与膜分离的优势.目前研究非水溶性亲和载体的较多，即通过对滤膜改性，使其具有亲和吸附目标物质的特性，宜于操作［2-3］.水溶性亲和载体与目标分子在均相中吸附和洗脱，反应速度快，达到平衡时间短，与非水溶性亲和载体比较具有显著优势.目前相关的报道集中在水溶性载体的应用［4-8］，在载体的制备及机理上的较少.

文献［9］中以合成的相对分子质量为10万的聚丙烯酰胺为水溶性载体分离胰蛋白酶.考虑到聚丙烯酰胺的潜在不安全性且卵粘蛋白是胰蛋白酶的抑制剂［10］，本研究采用对人体安全的相对分子质量为200万的水溶性葡聚糖，对其活化后连接卵粘蛋白为配基，制备卵粘蛋白－葡聚糖亲和载体，以卵粘蛋白作为胰蛋白酶的特异抑制剂，分析载体活化过程的相关机理，并将制备的亲和超滤载体应用于胰蛋白酶的纯化.

1 实验材料与方法

1.1 主要材料和设备

葡聚糖 T2000(相对分子质量为200万).卵粘蛋白、胰凝乳蛋白酶(结晶纯)，均购自Sigma公司;胰蛋白酶(1∶250，即每克酶制剂含250个酶活力单位)，购自上海伯奥生物科技公司;其它试剂为国产分析纯.

UV-2102 PC型紫外……