何 建,李艳君,祁芝珍,崔玉军,任玲玲,代瑞霞,王效义,崔百忠,张青雯,杨瑞馥,宋亚军

鼠疫是一种严重危害人类健康的人兽共患病。鼠疫菌是鼠疫的病原体,为革兰阴性菌,属于肠杆菌科的耶尔森氏菌属。比较基因组学研究表明,鼠疫菌在大约1 500-20 000年前由假结核耶尔森氏菌(以下简称假结核菌)进化而来[1-2]。作为一个相对“年轻”的病原细菌,鼠疫菌的生物学特征以及基因组结构均与其“祖先”—假结核菌极为相似。

在我国鼠疫防治实践中,“四步检验”(形态、镜检、噬菌体裂解以及动物实验)一直都是鼠疫菌鉴定的“金标准”[3]。而由于动物实验的成本较高,周期较长,噬菌体裂解实际上成为许多一线鼠疫防治机构进行鼠疫菌鉴定的重要依据。2005年,我们在进行菌株冻干入库前的动物试验时发现菌株55023能够被鼠疫噬菌体裂解,但是不能导致实验动物的死亡。因此,我们对该菌株进行了系统的表型和分子生物学鉴定,以确定其是否为鼠疫菌。

1 材料与方法

1.1 实验菌株 被试菌株55023,对照菌株为鼠疫菌标准株 141、91001、82009,以及假结核菌 Ⅰ型 5号(PTB),由青海省地方病预防控制所鼠疫菌保藏中心提供;染色体DNA均用传统的苯酚-氯仿法提取。

1.2 实验动物 昆明系小白鼠体重18～20g,由青海省实验动物中心提供。

1.3 主要试剂及仪器 鼠疫噬菌体、各类鉴定培养基均由青海省地方病预防控制所鼠疫室提供。鼠疫菌FI抗原、抗体检测试剂由北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司提供。TaqDNA聚合酶和dNTP购自大连 TaKaRa生物技术公司;GoldviewTMDNA染料由赛百盛公司提供;PCR扩增在MJ-25全自动PCR仪上完成。……