拟南芥AtMYB61基因的克隆及表达载体构建
2011-01-23任永兵曹树青
合肥工业大学学报(自然科学版) 2011年5期
王 云, 任永兵, 杨 硕, 韩 宇, 陶 杨, 曹树青
(合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥 230009)
0 引 言
随着一些抗逆基因的鉴定和抗逆机理不断深入研究,将外源抗逆基因导入植物的基因工程技术,在提高植物抗逆性方面具有更广泛的应用前景。但植物的抗逆应答是一系列相关基因连续表达调控的极其复杂的调控网络。在整个调控网络中,转录因子能调控多个相关基因的表达,所以增强转录因子的调控是提高植物抗逆性更有效的方法[1]。MYB转录因子是拟南芥中最大的基因家族[2]。该基因家族主要在植物的生长发育方面发挥重要作用,如植物次级代谢、信号传导、器官形成等方面[3]。另外,也有一部分参与了逆境胁迫介导的细胞应答[4-6]。大量研究证实,一些MYB转录因子的过量表达可以显著增加植物对逆境的耐受性[7,8]。
MYB61转录因子具有DNA结合结构域和转录调节结构域,其功能相当广泛,参与重金属、低磷和干旱等胁迫的信号调节,植物重金属胁迫与氧化胁迫是相关的[9]。AtMYB61基因在植物中过量表达,有利于进一步研究AtMYB61基因的抗逆分子机理。因此,本文利用RT-PCR克隆AtMYB61基因,并构建了 pCAMBIA2301-At-MYB61植物表达载体,为转基因改良植物抗逆性和进一步研究AtMYB61基因的抗逆分子机理奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 植物材料
哥伦比亚野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株,由美国拟南芥种质资源库提供,后由本实验室繁衍,贮存。
1.1.2 主要试剂
限制性内切酶 Eco91Ⅰ(BstEⅡ)为 Fermentas公司产品;TransTaq Polymerase High Fidelity(HiFi)为北京全式金产品;DNA凝胶纯化试剂盒……
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