刘加元 周伟

(1.湖北省中山医院药学部中药房 武汉 430033; 2.湖北省药品检验所 武汉 430028)

鸡血藤片质量控制研究①

刘加元1周伟2

(1.湖北省中山医院药学部中药房 武汉 430033; 2.湖北省药品检验所 武汉 430028)

目的 对鸡血藤片进行质量控制。方法 采用薄层色谱法(TLC)鉴别鸡血藤片中的芒柄花素,用高效液相色谱法测定其中芒柄花素的含量;以十八烷基硅烷键合硅胶填充剂,乙腈:水(33:67)为流动相,检测波长250nm,柱温30℃,流速1.0mL/min。结果 TLC鉴定方法专属性强,芒柄花素在进样量为0.01025ug～0.5125ug／mL(r=1.000)范围内呈良好线性关系。测得回收率平均值为99.10%,RSD为0.79%(n=6);供试品溶液在6h内稳定。结论 该法简便、迅速、结果准确可靠、重复性好,可用于鸡血藤片的质量控制。

芒柄花素 质量控制 薄层色谱法 高效液相色谱法

鸡血藤片主要用于补血活血,舒筋活络,可治疗腰膝酸痛、肢体麻木、风湿麻痹、经闭、痛经、月经不调等[1]。本研究采用高效液相色谱法测定鸡血藤片中其中一个有效成分芒柄花素的含量,且用薄层色谱法鉴定芒柄花素,建立简便、迅速、准确、专属性强的质量控制方法。

1 仪器与试药

DIONEX高效液相色谱仪;ULTIMAT3000;分析天平AG135和BS210S(梅特勒-托利多仪器有限公司);UV-500紫外分光度计 (英国热电公司);芒柄花素对照品(批号:111703-200501)均由中国药品生物制品检定所提供;利川香连药业(批号:090601、090701、090801);洛阳天生药业(090109);江西中兴汉方药业(090102);乙腈为色谱纯,水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。

2 质量控制

2.1 性状

本品为包糖衣型的片剂。

2.2 鉴别

取本品,除去糖衣,研细,取约2g,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,液蒸干,残渣加水20mL使溶解,用乙醚振摇提取3次,每次50mL,合并乙醚提取液,蒸干,残渣加无水乙醇5mL使溶解,作为供试品溶液;另取鸡血藤对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述二种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷∶乙酸乙酯(2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热5min,置紫外灯下(365nm)检视。检验结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。

表2 样品含量测定结果

3 方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱:HypersilODSC18(150mm×4.6mm,5um);流动相:乙腈∶水(33∶67);检测波长250nm;流速:1.0mL/min;柱温为30℃。取“3.2”、“3.3”、“3.4”项下供试品、标准品、空白辅料溶液进样测定,结果空白辅料对主药无干扰。

3.2 供试品的溶液制备。

取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约2g,精密称定,精密加入甲醇50mL,称定重量,加热回流提取1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL于蒸发皿,挥干溶剂,残渣加水20mL分次溶解并转移到分液漏斗,用乙酸乙酯振摇提取5次,每次30mL,合并乙酸乙酯提取液,挥干溶剂,残渣加甲醇使溶解,转移至10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得

3.3 标准品溶液制备

取芒柄花素对照品适量,精密称定,用甲醇制成5.125μg/mL的溶液,即得。

3.4 空白辅料溶液的制备

取缺鸡血藤提取物的阴性对照样品,照供试品溶液制备方法制备,即得。分别吸取上述3种溶液各10uL,按含量测定方法进行测定,结果在阴性对照溶液色谱图中,在芒柄花素峰位置处无干扰色谱峰。

表1 芒柄花素回收率试验结果

3.5 线性关系考察

取芒柄花素对照品适量,加甲醇制成系列浓度的标准品溶液(μg/mL:1.025、2.05、5.125、10.25、20.5、25.625、51.25)。照含量测定项下测定峰面积。以芒柄花素浓度对峰面积进行线性回归,得回归方程Y=1.04X-0.401r=1.000,芒柄花素在进样量为0.01025 μ g～0.5125 μ g(进样量10μL)范围内呈良好线性关系。

3.6 稳定性试验

取鸡血藤片(批号:090102),照含量测定项下制备供试品溶液。按含量测定项下方法在0、1、2、3、4、5、6h进样进行峰面积测定,结果:RSD为0.7%,表明供试品溶液在6h内稳定。

3.7 重复性试验

取同一批鸡血藤片共称取6份(批号:090102),按“3.2”项下方法制备供试品溶液,并按“3.1”项下色谱条件进行测定,以芒柄花素的含量计算。结果,芒柄花素的RSD为0.87%(n=6),表明方法重复性良好。

3.8 回收率试验

取已知芒柄花素含量的鸡血藤片(批号:090102含量为74.01ug/g)6份,每份约1g,分别加入芒柄花素对照品85.2ug,按含量测定项下测定。结果测得回收率平均值为99.10%,RSD为0.79%,表明方法回收率符合相关规定(表1所示)。

3.9 样品含量测定

分别取3个厂家的鸡血藤各20片,按“3.2”项下方法制备供试品液,精密吸取10uL进样分析,记录色谱;另取“3.4”项下标准品溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算供试品的含量,结果见表2

4 讨论

我们对标准品溶液在200～300nm内进行紫外光扫描结果发现在250nm处有最大的吸收,在试验中我们选择甲醇∶水(65∶35);乙腈∶水(33∶67)作为流动相,比较发现乙腈∶水为流动相的色谱分离度效果最佳,故采用。本方法检测有效成分芒柄花素简便,迅速、准确、专属性强、可检测鸡血藤片中的有效成分芒柄花素的含量,从而用于对鸡血藤片进行质量控制。

[1]中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:212～213.

[2]陈蕙芳.植物活性成分辞典[M].北京:中国医药科技出版社,2001.

[3]海力茜,徐建军.高效液相色谱法测定新疆红芪中芒柄花素的含量[J].华西药学杂志,2005:20(5):433.

R286.0

A

1674-0742(2011)05(c)-0150-02

刘加元(1974～):男,湖北武汉人,湖北省中山医院药学部中药房,主管药师,研究方向为医院药学。周伟(1976～):男,湖北武汉人,湖北省药品检验所中药室,副主任药师,研究方向为药品检验。

2011-02-16