(1.淄博市产品质量监督检验所,淄博 255033； 2.淄博市淄川区农业局,淄博 255033)

我国的油料产量居世界之首，食用油在储存时受到氧气、水、光、热和微生物的影响后，不饱和脂肪酸会逐渐氧化变质，生成醛、酮、醇、碳氢化物、环氧化物及酸之类的低分子物质而产生异臭、异味，解决这个问题既经济又有效的办法就是添加抗氧化剂,目前常用的抗氧化剂有BHA、BHT等。抗氧化剂能消除自由基，阻碍氧化反应的进行，提高油脂的稳定性，延长油脂的储存时间，但是抗氧化剂在减缓油脂腐败的同时也给人们带来了健康风险。研究表明BHT、BHA超量使用均对人体有害[1]。根据国家食品添加剂使用卫生标准GB 2760-2007(CNS号04.001、04.002)规定[2]，BHA、BHT可用于油脂，添加限量为0.2 g/kg，其检测方法有薄层色谱法、比色法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱-质谱法等[3-5]。GB/T 5009.30-2003[6]中采用气相色谱法和薄层色谱法，薄层色谱法检验步骤复杂，耗费时间长；气相色谱法中前处理需要装层析柱，需要大量的有机溶剂，费时长，检测成本高。笔者采用甲醇提取食用植物油中的抗氧化剂，仅用甲醇一种有机溶剂，用量少，快速简便，大大缩短了样品前处理时间，提高了检验效率，节约了实验成本。

1 实验部分

1.1 主要仪器、材料与试剂

气相色谱仪：6890型，配带FID检测器、Cerity色谱工作站，美国安捷伦公司。

蒸发器：容积200 mL；

硅胶G:180～250 μm(60～80目)，于120℃活化4 h，置于干燥器中备用；

弗罗里矽土(Florisil)：180～250 μm(60～80目)，于120℃活化4 h，置于干燥器中备用；

石油醚：沸程30～60℃；

二氯甲烷、二硫化碳、无水硫酸钠、甲醇：分析纯。

1.2 样品前处理方法

(1)国标第一法(GB/T 5009.30-2003)

层析柱的制备:于层析柱底部加入少量玻璃棉、少量无水硫酸钠，将硅胶-弗罗里矽土(6+4)共10 g，用石油醚湿法混合装柱，柱顶部再加入少量无水硫酸钠。

试样的制备:称取混合均匀样品2.00 g放入50 mL烧杯中，加30 mL石油醚溶解并转到层析柱上，再用10 mL石油醚分数次洗涤烧杯并转移到层析柱，用100 mL二氯甲烷分5次淋洗，合并淋洗液，浓缩近干，用二硫化碳定容至2.0 mL，进行气相色谱分析。

(2)甲醇提取法

称取均匀样品2.00 g置于10 mL具塞比色管，用4、3、3 mL甲醇分次提取，合并提取液，置冰箱冷冻层(-18℃)冷冻1 h，用滤纸过滤提取液(除去溶剂中剩余油脂)，进行气相色谱分析。

1.3 气相色谱条件

层析柱:1 cm×30 cm玻璃柱、带活塞；气相色谱柱:毛细管柱SE30(33 m×0.53 mm， 2.65 μm)；柱温：140℃；进样口、检测器温度：250℃;载气流速:氮气12.7 mL/min，氢气40 mL/min，空气350 mL/min；进样体积：1 μL。

1.4 BHA、BHT混合标准溶液的配制

(1)国标第一法：准确称取BHA、BHT各0.010 00 g混合后用二硫化碳溶解，定容至10 mL，此溶液中BHA、BHT的浓度均为1.0 mg/mL。再从中移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分别于10 mL容量瓶中，以二硫化碳定容，此时标准系列的浓度分别为0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL。

(2)甲醇提取法:方法同(1)，只是将溶剂改用甲醇。

2 结果与讨论

2.1 线性范围及相关系数

对1.4(1)、1.4(2)系列标准溶液分别进样1 μL进行气相色谱分析。以标准溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，实验结果表明，BHA、BHT浓度在0～0.10 mg/mL范围内均有良好的线性关系,对于1.4(1)系列标准溶液BHA、BHT的线性方程分别为y=14 889x-1.333 3×10-13，y=20 626x-4.093 88×10-13；对于1.4(2)系列标准溶液BHA、BHT的线性方程分别为y=13 744x-3.841 6×10-13，y=18 911x-1.534 2×10-12。相关系数r均大于0.999。

将0.10 mg/mL的BHA、BHT混合标准溶液溶液分别稀释10、100、 1 000、10 000倍(浓度分别为0.010、0.001 0、0.000 10、0.000 010 mg/mL)后，测定信号值，采用3倍信噪比计算检出限。BHA、BHT的浓度为0. 1 μg/mL时，仪器的信号值为基线噪声的3倍，因此，BHA、BHT的检出限分别为0.1 μg/mL。

图1、图2分别为国标第一法和甲醇法处理的浓度为0.10 mg/mL的BHA、BHT混合标准溶液的色谱分离图。由图1、图2可见，国标第一法和甲醇法得到的混合标准溶液在1.3色谱条件下均得到了较好的分离，出峰保留时间在10～13 min之间。

图1 国标第一法混合标准溶液分离谱图

图2 甲醇提取法混合标准溶液分离谱图

2.2 精密度试验

用两种不同方法对样品进行前处理，然后各连续测定11次，计算测定结果的相对标准偏差。国标第一法处理后BHA、BHT测定结果的相对标准偏差分别为3.85%、3.78%；甲醇提取法处理后BHA、BHT测定结果的相对标准偏差分别为4.23%、4.30%，试验结果见表1。

表1 方法精密度试验结果

2.3 回收试验

国标第一法：称取不含BHT、BHA的食用油2.00 g于50 mL烧杯中，分别加入BHA、BHT各0.10、0.20、0.40、0.60 mg，以下处理同1.2(1)。

甲醇提取法：称取不含BHT、BHA的食用油2.00 g于50 mL具塞离心管中，分别加入BHA、BHT各0.10、0.20、0.40、0.60 mg，以下处理同1.2(2)。

采用国标第一法、甲醇提取法对样品进行前处理后，分离提取，用气相色谱仪对BHA、BHT进行分析。国标第一法处理后样品的加标回收率为90%～105%；甲醇提取法处理后样品加标回收率为90%～98%，试验结果见表2。经t检验，两种方法测得的回收率无显著性差异(P<0.05)。

表2 BHA、BHT回收试验结果

3 结论

采用甲醇提取-气相色谱法检测食用油中的BHA、BHT并与国标第一法比较，两种方法的精密度、准确度均较好。但国标第一法前处理过程比较复杂，处理好的待测样中有少量的油脂残留，有可能对检验结果造成影响，并且会缩短分析柱的使用寿命；该法的分析时间较长并使用大量的有机溶剂，检测费用高，废液污染环境。甲醇提取法仅需要10 mL甲醇，省去过层析柱的时间，简单、快速且节省试剂；样品提取液冷冻后经滤纸过滤，除去了油脂，有利于保护色谱柱和延长其使用期限，因此甲醇提取法优于国标第一法(柱层析法)。在日常大批量检测工作中，甲醇提取法更加快速、简便、环保。

[1] 凌关庭.食品抗氧化剂及其进展(三)[J].粮食与油脂,2000(8):45-47.

[2] GB 2760-2007 食品添加剂使用卫生标准[S].

[3] 中国林业科学研究院分析中心.现代实用仪器分析方法[M].北京:中国林业出版社,1994:104.

[4] 胡小钟,余建新,钱浩明,等.油脂中九种抗氧化剂的反相高效液相色谱法分离和测定[J].分析科学学报,2000,16(1):23-26.

[5] 郭岚，谢明勇，鄢爱平，等.气相色谱-质谱法同时测定食用植物油中三种抗氧化剂[J].分析科学学报,2007,23(2):169-172.

[6] GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定[S].