李国辉，唐琦，张俊红，郭旭丽，胡朝阳，姚勤

(江苏大学生命科学研究院，江苏镇江212013)

家蚕细小病毒样病毒(Bombyx mori parvo-like virus，BmPLV)是一类无囊膜包被的、单链、双分子DNA病毒，具有20面体结构，大小约19～24 nm，能特异性感染家蚕中肠柱状上皮细胞，导致家蚕罹患软腐病［1-2］。本研究小组于2005年完成了镇江株基因组的克隆和测序，其序列分析表明该病毒基因组为线性、单链双分子DNA，其中VD1由6 543个核苷酸组成，理论上含有4个开放读码框;VD2由6 022个核苷酸组成，理论上含有2个开放读码框［3］。VD1序列分析进一步表明其基因组内含有一个大的开放读码框(命名为ORF4)，由3 318个核苷酸组成，理论上编码1个含有1 115个氨基酸组成的蛋白，同源搜索发现该蛋白质与以蛋白为引物的DNA聚合酶B家族同源，该蛋白氨基酸一级序列706～1 004位点处存在5个保守的区域:Dx2SLYP(motifⅠ)，Kx3NSxYG(motifⅡ)，Tx2G_AR(motifⅢ)，Yx-DTDS(motifⅣ)和KxY(motifⅤ)，这些区域与DNA聚合酶的功能有关，例如:DNA合成，dNTP结合，以及磷酸化水解等［4-5］。由此推测VD1 ORF4编码的蛋白具有DNA聚合酶活性，可能负责病毒自身DNA的复制。鉴于该蛋白在感染组织中的真实分子量大小、在病毒复制、侵染过程中的具体作用未知以及鉴定其与宿主相互作用蛋白因子等方面的考虑，为此，获得该蛋白的高效价抗体是一种常用且有效的研究手段。本研究扩增家蚕细小病毒样病毒VD1 ORF4编码DNA聚合酶的同源区，并将构建的表达载体转化原核细胞中进行诱导表达，以表达的产物免疫昆明小鼠制备该蛋白的抗体。对VD1 ORF4理论上的编码框序列进行生物学信息分析，在不发生移码的基础上发现其有18个可以采用的起始密码子ATG，而选择不同的ATG作为翻译起始位点可以产生分子量大小不同的蛋白质，浓核病毒中很多蛋白正是通过核糖体对同一信使mRNA漏扫描翻译而来的。……