李桂秀，任子瑜，李震宇，杨国红，秦雪梅，2*

（1.山西大学 中医药现代研究中心，山西 太原 030006；2.山西大学 化学化工学院，山西 太原 030006；3.上海医药工业研究院，上海 200040）

一测多评法测定党参中党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的含量

李桂秀1，2，3，任子瑜1，李震宇1，杨国红3，秦雪梅1，2*

（1.山西大学 中医药现代研究中心，山西 太原 030006；2.山西大学 化学化工学院，山西 太原 030006；3.上海医药工业研究院，上海 200040）

采用HPLC法以药材中专属性成分党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ为指标，在一定范围内，建立党参炔苷与党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ之间的相对校正因子（0.290 9，0.927 7），并用所建立的相对校正因子计算其它2个成分的含量；同时采用外标法测定7种不同来源药材中以上3种成分的含量（实测法），比较计算值与实测值的差异，以验证一测多评法的准确性和科学性.结果表明：党参药材中3种专属性成分可以用一测多评法进行测定，实测值与计算值间没有明显差异（RSD＜4%）.

一测多评法；党参；校正因子；质量控制

党参药材为桔梗科植物党参（Codonopsis pilosula （Franch.）Nannf.）、素花党参（C.pilosula Nannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen）或川党参（C.tangshen Oliv.）的干燥根.其味甘、性平、归脾、肺经，具有补中益气、健脾益肺的功效.2010年版《中国药典》中没有含量测定项，仅有以党参炔苷为对照的薄层鉴别项［1］.文献［2-5］对党参的质量控制研究也较多，大都为党参炔苷、苍术内酯Ⅲ或阿魏酸等单一质控指标的报道，但要达到总体客观评价党参药材的质量，仅以其中的某个单一成分为指标来控制其质量是不全面的.本文以党参的专属性成分党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ为指标，同时测定这3种成分在党参药材中的含量.

考虑到多指标质量控制需要对照品的种类和量比较大，王智明等提出了一测多评的多指标质控模式［6］，即在多指标质量控制时，以药材中对照品易得的典型成分为内标，建立该成分与其它成分间的相对校正因子，再通过校正因子计算出其它成分的含量.在方法实施时，可在只有一个对照品而其余对照品不足的情况下，实现这些成分的同步含量测定.并成功应用于木通、黄连、黄芩、人参、三七和吴茱萸等药材的质量控制［7-10］，其中黄连药材的一测多评方法被2010年版《中国药典》采用［1］.本实验以7个不同产地的党参药材为研究对象，以党参炔苷为参照物，建立其与党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ之间的相对校正因子；同时用外标法同步测定，验证一测多评法得到的结果.在评价党参药材时，用外标法测定党参炔苷，再通过校正因子计算得出党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的含量.

1 实验仪器与材料

Waters1525-2487高效液相色谱仪，Breeze系统；Elite P230高效液相色谱仪，EC2000色谱工作站；色谱柱Elite SinoChrom ODS-BP（5μm，200 mm×4.6 mm），Dikma Diamonsil C18（5μm，200 mm×4.6 mm）；党参药材来源见表1（P91）.

党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ对照品为本课题组自制，HPLC测定（面积归一化）纯度＞98%.甲醇（Tedia公司）和乙腈为色谱纯（山东禹王实业有限公司），水为高纯水（自制），其余试剂均为分析纯.

表1 不同党参药材来源Table 1 Samples of Radix Codonopsis from different source

2 方法与结果

2.1 方法与原理

在一定的线性范围内，药材成分的量与检测器的响应值成正比，即：W＝fA.通过分别测定混合对照品中几种成分的浓度及相应的检测值，建立其中某一组分（对照品量充足者）与其它组分间的相对校正因子.测定样品时，通过测定药材的结果某一组分的含量，用相对校正因子计算出其它组分在同一个样品中的含量［6］.

2.2 一测多评方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：大连Elite SinoChrom ODS-BP C18（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脱0～13 min，体积分数25%A；13～30 min，25%A升高到60%A；30～35 min，60%A；35～40 min，60%A降低到25%A；流速1 m L·min-1，检测波长：220 nm，柱温：25℃.进样量10μL.对照品及样品色谱图见图1（P92）.

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度分别为74.4，19.3，110.4μg·m L-1的混合对照品溶液，同时配制一份6.20 mg·m L-1的党参炔苷对照品，备用.2.2.3 供试品溶液的制备

取过20目筛的党参药材样品粉末约5.0 g，置于100 m L具塞锥形瓶中，加入甲醇50 m L，称重，超声0.5 h，放凉，补重后过滤，旋干滤液，15 m L水混悬后，用30 m L的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，旋干，甲醇溶解后定容至5 m L量瓶中，摇匀，0.45μm滤膜过滤，照“2.2.1”项下的色谱条件测定.

2.2.4 线性范围试验

依次精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶液2，4，6，10，12，15μL，注入高效液相色谱仪，照“2.2.1”项下的色谱条件测定，记录峰面积.以进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行回归处理，结果表明党参炔苷在0.15～1.12μg范围内线性关系良好，回归方程为Y＝4.17×106X＋1.55×105（r＝0.999 5）；党参苷Ⅳ在0.04～0.29μg范围内线性关系良好，回归方程为Y＝1.24×106X＋9.46×103（r＝0.999 8）；苍术内酯Ⅲ在0.22～1.66μg范围内线性关系良好，回归方程为Y＝4.07×106X＋1.61×105（r＝0.999 9）.

2.2.5 重复性

取同一批党参药材（山西陵川）约5.00 g，共6份，照“2.2.3”项下制备供试品溶液并测定，党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的平均质量含量分别为0.143 6、0.057 6和0.211 8 mg·g-1，RSD分别为2.97%，2.20%，1.75%.

2.2.6 精密度

吸取混标溶液10μL，照“2.2.1”项下的色谱条件测定，重复进样6次，记录峰面积，计算党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ峰面积RSD的分别为2.28%，1.96%和1.39%.

图1 党参药材中3种专属性成分的色谱图（A-党参药材样品；B-对照品）Fig.1 HPLC Chromatograms of Radix Codonopsis 3 specific compositions（A-Radix Codonopsis samples；B-reference substances）

2.2.7 稳定性

精密吸取同一供试品溶液，照“2.2.1”项下的色谱条件分别于4，6，8，10，12，24 h测定，记录峰面积.分析得出党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的峰面积RSD分别为2.44%，1.84%和1.79%，说明样品在24 h内稳定.

2.2.8 回收率

称定已知含量的党参药材（山西陵川）约2.50 g，共6份，分别加入含党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的对照品溶液2.5 m L，挥干，照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各吸取10μL，照“2.2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算加样回收率，党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的加样回收率分别为99.3%、98.4%和97.8%，RSD分别为2.58%、2.16%和2.36%.

2.2.9 相对校正因子的计算

以党参炔苷为内标，计算党参炔苷对党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的相对校正因子f党参炔苷／苷Ⅳ，f党参炔苷／苍术内酯Ⅲ，结果见表2（P93）.

表2 党参的相对校正因子（n＝3）Table 2 Relative correcting factors（RCF）of Radix Codonopsis（n＝3）

2.3 系统耐用性试验

2.3.1 不同色谱柱及高效液相色谱仪考察

取“2.2.2”项下对照品溶液，精密吸取10μL进样，照“2.2.10”项下计算党参炔苷对党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的相对校正因子.考察了Elite P230、Waters1525-24872种高效液相色谱系统和Elite SinoChrom ODSBP（5μm，200 mm×4.6 mm）、Dikma Diamonsil C18（5μm，200 mm×4.6 mm ）2种色谱柱，结果见表3.

表3 不同仪器和色谱柱测得相对校正因子（n＝3）Table 3 RCFs determined by different instruments and columns（n＝3）

2.3.2 待测组分色谱峰的定位

利用相对保留时间（Rt）差定位：已知某典型成分的保留时间，加上相对保留时间差，并结合紫外吸收特征，即可判断出目标峰的位置［6-7］，结果见表4.由表4可知，RSD＜2%，表明利用相对保留值差进行峰定位是可行的.

表4 不同色谱柱下目标成分间保留时间差（n＝3）Table 4 Relative retention time（RTR）determined by different columns（n＝3）

2.4 一测多评方法与外标法比较

取7种不同的党参样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别吸取10μL，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定.利用一测多评法和外标法分别计算党参药材中党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的含量，结果见表5.

表5 不同来源党参样品中含量测定结果（mg·g-1）Table 5 Contents of specific compositions by external standard method and QAMS（mg·g-1）

为确定“一测多评”法的准确性，我们用外标法进行比较.其含量间的相对标准偏差在4%以内，两种含量测定方法得到结果差异较小，表明一测多评法应用到党参药材的多指标质量控制是可行的.

3 讨论

本实验优化了党参药材的备样方法，比较了党参药材甲醇提取物的正丁醇和乙酸乙酯萃取物，比较HPLC图谱可以发现，正丁醇萃取物的杂质干扰样品目标峰的测定，而乙酸乙酯萃取物杂质干扰较小，因此，本实验选用乙酸乙酯萃取物进行HPLC测定.

本实验测定的7个不同来源党参药材样品，湖北恩施市的板桥党中党参炔苷含量最高，而山西陵川的潞党参中含量最低；山西陵川药材基地的潞党参中党参苷Ⅳ含量最高，而山西交城县庞泉沟中含量最低；山西平顺县老马岭中苍术内酯Ⅲ含量最高，而湖北恩施市的板桥党含量最低.以上结论对不同产地的党参药材的质量评价有一定的指导作用.

通过实验初步建立了一测多评法用于党参药材中多成分的同步测定，并且所得党参药材中各成分含量与常规外标法所测得的含量无显著差异，说明在仅有一个对照品时，可通过一测多评法实现同步测定党参药材中多指标成分，并且可以建立党参多指标质量控制的模式.

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］ 孙庆文，何顺志，黄敏.黔产管花党参中党参炔苷的含量测定［J］.时珍国医国药，2007，18（8）：1931-1932.

［3］ 刘养清，赵平，巫剑峰，等.党参饮片中党参内酯和党参炔苷的相关性研究［J］.药物分析杂志，2008，28（11）：1841-1844.

［4］ 王峥涛，徐国钧，难波恒雄，等.党参中苍术内酯Ⅲ的 HPLC分析［J］.中国药科大学学报，1991，23（1）：48-50.

［5］ 王爱娜，秦雪梅，张勇，等.高效液相色谱法测定不同产地党参中苍术内酯Ⅲ的含量［J］.中国药学杂志，2005，40（18）：1436-1437.

［6］ 王智民，高慧敏，付雪涛，等.“一测多评”法中药质量评价模式方法学研究［J］.中国中药杂志，2006，31（23）：1925-1928.

［7］ 朱晶晶，王智民，张启伟，等.一测多评法同时测定黄芩药材中4种黄酮类成分的含量［J］.中国中药杂志，2009，34（24）：3229-3234.

［8］ 朱晶晶，王智民，匡艳辉，等.一测多评法同步测定人参和三七药材中多种人参皂苷的含量［J］.药学学报，2008，43（12）：1211-1216.

［9］ 宋亚芳，王智民，朱晶晶，等.一测多评法测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量［J］.中国中药杂志，2009，34（21）：2781-2785.

［10］ 匡艳辉，朱晶晶，王智民，等.一测多评法测定黄连中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱含量［J］.中国药学杂志，2009，44（5）：390-394.

Assay of Lobetyolin，TangshenosideⅣand AtractyloideⅢin Radix Codonopsis by QAMS

LI Gui-xiu1，2，3，REN Zi-yu1，LI Zhen-yu1，YANG Guo-hong3，QIN Xue-mei1，2
（1.ModernResearchCenterforTraditionalChineseMedicine，ShanxiUniversity，Taiyuan030006，China；2.SchoolofChemistryandChemicalEngineering，ShanxiUniversity，Taiyuan030006，China；3.ShanghaiInstituteofPharmaceuticalIndustry，Shanghai200040，China）

The relative correction factors（RCF）of three specific compositions were determined by HPLC.Within the linear ranges，the values of RCF at 220 nm of tangshenosideⅣ，atractyloideⅢto lobetyolin，were 0.290 9，0.927 7，respectively.And the contents of lobetyolin in 7 samples of Radix Codonopsis determined by the extemal standard method，and the contents of the two other specific compositions were calculated according to their RCF.The contents of these three specific compositions in the all samples were determined with the external standard method.The results indicated that no significant differences were found in the quantitative results of three specific compositions in 7 batches of Radix Codonopsis determined by external standard method and QAMS（RSD＜4%）.

quantitative analysis of multi-components by single marker（QAMS）；relative correction factor；Radix Codonopsis；quality control

R917

A

0253-2395（2011）S2-0090-06

2011-09-02

山西省国际合作项目（2008081043；2010081070）；山西省科技厅科技攻关计划（052018）；山西省中药现代化科

技创新平台建设项目（2005091016-0502）

李桂秀（1988-），女，在读硕士，研究方向为中药质量标准及工艺的研究.*通信作者：E-mail：qinxm＠sxu.edu.cn