陈芳,王菊,宋勇,周宗瑶

(石河子大学医学院,石河子832002)

pcDNA3.1-GCNF真核表达载体构建及其对HeLa细胞凋亡的影响

陈芳,王菊,宋勇,周宗瑶

(石河子大学医学院,石河子832002)

构建人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体,并瞬时转染宫颈癌 HeLa细胞,观察 GCNF基因对 HeLa细胞凋亡的影响。采用PCR的方法从pMD18-T-GCNF载体中扩增全长 GCNF cDNA,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),测序鉴定后,重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染 HeLa细胞,RT-PCR以及间接免疫荧光鉴定转染结果,并用Annexin V-PI双染流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果显示,克隆的重组真核表达载体经序列测定分析后,证实pcDNA3.1-GCNF重组真核表达质粒构建成功,并获得瞬时转染pcDNA3.1-GCNF的 HeLa细胞。流式细胞术检测:转染重组质粒组的细胞凋亡率(6.72%)低于转染空质粒组(9.78%)以及未转染组(9.34%),P<0.00313,转染重组质粒后细胞凋亡率降低。由此可知,pcDNA3.1-GCNF重组质粒瞬时转染子宫颈癌 HeLa细胞后,GCNF基因可以抑制 HeLa细胞凋亡。

GCNF;真核表达载体;HeLa细胞;转染

在我国子宫颈癌患病率位于妇科肿瘤第一位,而且近年来患病率也在逐年上升且有年轻化的趋势,它的恶性生物学行为与某些促进细胞增殖或抑制细胞凋亡的基因密切相关。生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)是转录因子超家族的一名孤儿核受体,研究证实,GCNF是一个转录抑制因子,具有抑制OCT-4基因表达的功能。GCNF基因高表达于发育中的生殖细胞,此外在一些生殖系肿瘤细胞如畸胎瘤中也能检测到,但尚未见该基因与生殖系以外肿瘤的关系报道。

有研究表明,异位表达Oct4基因可以引起上皮细胞的异常增生,可能与肿瘤的形成有密切的关系。子宫颈癌系上皮性肿瘤,已有研究显示,在宫颈癌细胞株(HeLa细胞)中有Oct-4的表达[1],Oct-4作为转录因子受 GCNF调控,那么 GCNF是否与宫颈癌细胞有关?目前尚未见报道。……