赵峰玉,郑银英,张瑜,乔亚红,崔百明,向本春

(石河子大学农业生物技术重点实验室/石河子大学生命科学院,石河子832003)

抗番茄花叶病毒RNAi载体的构建及烟草遗传转化

赵峰玉,郑银英,张瑜,乔亚红,崔百明,向本春

(石河子大学农业生物技术重点实验室/石河子大学生命科学院,石河子832003)

为了获得抗番茄花叶病毒的转基因烟草,试验采用RT-PCR技术扩增新疆加工番茄花叶病毒基因组,然后与已知株系序列比对获得相应的保守序列。根据保守区选择干扰序列并设计引物进行 PCR扩增,构建了pBi35STo5,pBi35SToBK,pBi35ToMV3 3个RNAi表达载体;利用农杆菌介导法分别将表达载体侵染普通烟,转化植株经分子鉴定,结果显示已成功获得了转基因阳性植株,为进一步的攻毒试验奠定了基础。

加工番茄;RNAi;番茄花叶病毒

番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)是一类世界性分布的植物病毒,其寄主范围很广,能侵染茄科、十字花科等许多植物,其中番茄是其主要寄主[1]。在新疆许多加工番茄种植区,番茄病毒病大面积的普遍发生,症状十分复杂,有的地块发病率高达100%,造成产量下降,甚至绝产[2]。近年来,该病害在新疆有逐年加重的趋势,严重影响了加工番茄的产量和品质。

番茄花叶病毒(ToMV)属烟草花叶病毒属,病毒粒子为杆状,其基因组为单链正义RNA,共编码4个蛋白:130/180 kDa复制酶蛋白、30 kDa移动蛋白(MP)和17 kDa外壳蛋白(CP)。ToMV的复制酶蛋白是由进入寄主细胞的基因组RNA直接翻译而成,而CP和MP是在病毒复制过程中产生的亚基因组翻译生成[3-4]。其复制酶蛋白在病毒的复制中起主要作用,MP主要参与病毒在细胞间的运输,而CP在辅助病毒衣壳化、识别宿主、病毒的长距离运输中起到重要作用。……