刘振云，沈露，解凤立，谭树华

(1．中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室，江苏南京 210009;2．中国药科大学药物分析教研室，江苏南京 21009)

抑肽酶(aprotinin)是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制剂，该酶主要从牛肺等组织中提取，由58个氨基酸残基组成。它是一种碱性蛋白，等电点为10．5，链内有3个二硫键相互交联。长期以来，抑肽酶一直被用于急性胰腺炎的治疗。它抑制激肽释放酶以及纤溶酶的活性，从而达到止血的目的，因此可显著减少手术中及手术后病人的出血。1993年经FDA批准，抑肽酶可用于胸外科手术以及有凝血障碍、可能出现大出血病人的治疗［1－2］。目前，商业生产的抑肽酶是从牛胰腺和肺中提取，工艺程序复杂、原材料的获取及储存费用大，且各种传染病(如疯牛病)的病原体污染也限制了其应用，因而用基因工程方法生产抑肽酶具有重要意义［3－4］。

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是一种可高效表达外源蛋白的表达系统，具有遗传稳定性。毕赤酵母的醇氧化酶(AOX)基因的启动子具有强诱导性和强启动性，适于外源基因的高水平诱导表达，可高密度发酵等许多优点，应用十分广泛，已有数百种外源蛋白在该系统中获得表达［5］。我们对本实验室构建的分泌表达重组抑肽酶毕赤酵母菌pSA/GS115进行了高密度发酵培养工艺研究。

1 材料与方法

1． 1 材料

1．1．1 菌株与质粒 分泌表达重组抑肽酶毕赤酵母菌pSA/GS115系本实验室构建并保存，具有Mut+表型。1．1．2 试剂 酵母粉、蛋白胨、无机盐购自南京四新科技应用研究所有限公司。……