黄海良，罗 欣，顾 芳，张胜权

(安徽医科大学 生物化学与分子生物学教研室，安徽 合肥 230032)

人白细胞介素-31的真核表达及其对HaCaT细胞IL-6和TNFα表达的影响

黄海良，罗 欣，顾 芳，张胜权

(安徽医科大学 生物化学与分子生物学教研室，安徽 合肥 230032)

目的 构建人白细胞介素-31(hIL-31)基因真核表达载体并将其转染到HaCaT细胞，观察其对HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法 分离人外周血单核细胞，加入终浓度为20 nmol/L的豆蔻佛波醇乙酯(PMA)，继续培养24 h收集细胞。RT-PCR克隆hIL-31 cDNA，并将其克隆到真核表达载体pSecTag2/Hygro B上。将构建成功的重组体转染至HaCaT细胞，用Western blot分析hIL-31在细胞中的表达以及RT-PCR方法分析其对IL-6、TNFα表达的影响。结果 经双酶切、测序及Blast分析鉴定，我们成功获得hIL-31基因cDNA全长序列和pSecTag2/Hygro B-IL-31重组体。转染至HaCaT细胞的外源性hIL-31可以促进IL-6、TNFα的表达。结论 hIL-31可以通过自分泌的方式促进HaCaT细胞炎性相关细胞因子的表达。

人白介素-31;真核表达;皮肤角质形成细胞

人白细胞介素-31(human interleukin-31，hIL-31)是新发现的gp130/il-6细胞因子家族成员，其主要由激活的CD4+T淋巴细胞产生。基因定位于12q24.31，全长 904 bp，开放阅读框为 495 bp，编码一条由164个氨基酸残基组成的多肽链，成熟的蛋白质分子含有141个氨基酸［1］。而hIL-31受体是由GPL(gp130-like receptor)和人制瘤素M受体(OSMR)组成的异源二聚体［2］。HIL-31与其受体结合后可以激活Jak/STAT，P13K/AKT和MAPK通路进而发挥其广泛的生物学作用。Dillon等［3］研究表明hIL-31在皮肤炎症中发挥着重要作用。本实验通过hIL-31的基因克隆、真核表达以及转染至人皮肤角质形成细胞后对细胞炎性因子表达的影响，探讨其对皮肤角质形成细胞炎性因子表达的调控作用以及其在机体炎性反应中的作用。……