张明明,王小辉,秦爱建

(扬州大学兽医学院,江苏扬州225009)

禽腺病毒(fowl adenovirus,FAV)属腺病毒科(Adenoviridae),是鸡、鸭、鹅等禽类常见的传染性病原体之一。近年来,从鹦鹉、长尾鸭、肉鸡等禽类体内分离到了多种新的血清型FAV,某些病毒株还发生了变异[1-3]。陈溥言提出鸡胚致死孤儿病毒(chicken embryo lethal orphan virus,CELOV)已污染我国研究用和疫苗生产用非免疫鸡胚[4]。最近,周斌等用随机引物PCR方法从鸭肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒中扩增出了污染的CELOV DNA片段,证实了这种污染的严重性[5]。本试验通过血凝试验、电镜技术、细胞病变以及动物试验等方法,研究了3株不同禽源的FAV分离株的病毒特性、形态特征和致病特点等,以期为了解其致病性和研制FAV基因工程疫苗提供条件。

1 材料与方法

1.1 材料 FAV分离株FAVI-C4-YZ0605、FAVI-D4-YZ0605和FAVI-G24-YZ0605分别采自江苏省扬州市活禽市场外表健康的鸡群、鸭群和鹅群,其分离、鉴定和鸡胚扩增由江苏省动物预防医学重点实验室完成。SPF鸡胚购自山东省无特定病原种鸡场,由江苏省动物预防医学重点实验室孵化至使用日龄。1日龄SPF鸡购自中牧集团南京药械厂。鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)生长所需的基础培养基DMEM购自Gibco公司。透射电镜由扬州大学测试中心提供。

1.2 病毒形态观察 FAV鸡胚尿囊液中加入1/10体积的氯仿,充分混匀,3 000 r/min离心5 min后,吸取上清,重复此步骤直至分层之间无白色沉淀。然后将上清装入透析袋中,外层包裹 PEG-6 000浓缩至一定体积后,收集到指形管中,加入1/10体积的氯仿继续抽提直至分层之间无白色沉淀。取少量上清,负染后,透射电镜观察病毒的形态结构。……