国家标准对阿咖酚散中水杨酸要求的限度是不得过阿司匹林的2%，但最新的2010版[3]药典中阿司匹林原料药和阿司匹林片也采用高效液相色谱法控制杂质水杨酸，只是改变了流动相和溶剂等色谱条件，且水杨酸限度分别为0.1%和0.3%。随着标准的提高，要求药检人员更加注意质量标准实践中的细节。笔者在日常药检工作中，对阿咖酚散国家标准中规定的阿司匹林的降解产物水杨酸的检查进行了实践，现提出一些注意事项供参考交流。

1 仪器与试药

美国Agilent -1200型高效液相色谱仪，TB-215D电子天平（德国赛多利斯公司），KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。对照品对乙酰氨基酚（批号：100018-200408）、咖啡因（批号：171215-200608）、阿司匹林（批号：100113-200603）、水杨酸（批号：100106-200303）均购自中国药品生物制品检定所，含量测定用。甲醇为色谱纯，去离子水为本实验室自制，其他试剂均为分析纯。阿咖酚散（批号：R1832），规格为：每盒100包，每包含阿司匹林230 mg、对乙酰氨基酚126 mg、咖啡因30 mg）由广州白云山制药股份有限公司白云山何济公制药厂提供，药品质量标准为国家药品监督管理局国家药品标准：WS—10001—(HD— 0941) —2002。

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Hanbon Packing Material Li chrospher 5-C18(150 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至2.6±0.1）-甲醇（7∶3）；检测波长为254nm；流速为1.0ml/ml；柱温为30 ℃。

2.2 样品测定 照阿咖酚散药品标准中游离水杨酸检查项配制对照品溶液和供试品溶液。将供试品溶液配好后立即注入液相色谱仪和放置20min、1h、4h、8h后注入液相色谱仪，记录色谱图。

3 实验结果

见附图、附表。

附图 HPLC色谱图

4 讨论

3.1 检测波长 水杨酸紫外吸收光谱扫描结果显示，254nm为水杨酸最小紫外吸收波长[2]，显然该波长不利于阿咖酚散中主要有关物质水杨酸的测定。因此在实际操作中，为了达到更好的测定效果，应利用二极管阵列扫描来确认在其他波长处，水杨酸的含量也符合质量标准限度。

附表 阿咖酚散不同放置时间测定的水杨酸峰面积

3.2 流动相 有文献报道[2]，流动相中磷酸二氢钾浓度和甲醇的比例对各组分的分离影响很大，随着磷酸盐浓度的增加保留时间均有提前；流动相的pH值对阿咖酚散中组分的测定也有较大影响，阿司匹林在碱性溶液中易于水解，而在酸性溶液中可以减少其降解程度，因此在调节流动相pH值时，可以适当加大磷酸用量，使流动相的pH值在2.6以下，从而减少阿咖酚散中阿司匹林的降解程度。

3.3 放置时间 实验结果的图谱可以看出，随着放置时间的延长，样品溶液中水杨酸的峰面积不断增大，样品放置8小时后的水杨酸峰面积是放置20min后样品的9.7倍，可见随放置时间延长阿司匹林水解为水杨酸的量不断增加，因此随着放置时间的延长可能导致杂质水杨酸含量超限，而主要成分之一的阿司匹林含量则降低甚至使阿司匹林含量低于标准要求。配制样品时要现配现用，才能确保阿司匹林含量测定和水杨酸杂质检查的准确性。