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HPLC测定牛黄解毒片中大黄素的含量

2010-10-16高卫东李翠玲

中国现代中药 2010年9期
关键词:三氯甲烷牛黄黄素

高卫东,李翠玲

(佛山市药品检验所,广东 佛山 528000)

HPLC测定牛黄解毒片中大黄素的含量

高卫东*,李翠玲

(佛山市药品检验所,广东 佛山 528000)

目的:建立高效液相色谱法测定牛黄解毒片中大黄素含量的方法。方法:采用Hypersil C18色谱柱,流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15),检测波长:289 nm,流速:1.0 mL·min-1,柱温:30℃。结果:大黄素在0.025~0.25μg线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为97.25%,RSD=1.1%(n=6)。结论:该方法快速简便,准确可靠,可用于牛黄解毒片的质量控制。

高效液相色谱法;牛黄解毒片;大黄素

牛黄解毒片现收载于 《中国药典》2010年版(一部),由人工牛黄、石膏和大黄等8味中药组成。具有清热解毒的功能,用于火热内盛,咽喉肿痛,牙龈肿痛,口舌生疮,目赤肿痛等[1]。原标准的含量测定项仅对黄芩中黄芩苷的含量进行了测定,而没有对方中用量最大的大黄进行含量测定。大黄素是大黄的主要活性成分,具有良好的抗微生物、抗炎、抗肿瘤活性和免疫抑制等作用,与牛黄解毒片的功效主治接近,为了更加有效地控制该产品内在质量,完善和提高其质量标准,本文建立了高效液相色谱法测定制剂中大黄素含量的方法,该方法简单、准确、重现性好。

1 仪器与试药

HP1100型系列高效液相色谱仪(美国),AE-240电子分析天平(瑞士Mettler)。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110756-200110);牛黄解毒片(江西心诚药业有限公司,批号20081101,20081104,20081209),甲 醇 为 色 谱 纯 (德 国Merck),水为超纯水(韩国 Power Iplus超纯水系统),其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS2(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15);检测波长:289 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃。进样量:10μL。在此条件下,方中其他成分对大黄素测定无干扰,对照品和制剂样品在相同的保留时间处有吸收峰,而阴性样品无吸收峰,见图1。

图1 牛黄解毒片HPLC图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1 mL含25μg的溶液,作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片(包衣片除去包衣),精密称定,研细,取0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5 mL,置烧瓶中,挥去溶剂,加8%盐酸溶液10 mL,超声处理10 min,再加三氯甲烷10 mL,加热回流1 h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液用三氯甲烷提取3次,每次10 mL,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇使溶解,转移至10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

照处方比例制备缺大黄的牛黄解毒片,照2.3项下操作,制备阴性样品溶液。

2.5 线性关系的考察

精密吸取大黄素对照品溶液1,2,4,6,8,10 mL分别置6个10 mL的量瓶中,加甲醇稀释至刻度。分别吸取上述6种溶液各10μL,测定。以测得的峰面积为纵坐标,对照品进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,求得回归方程为Y=7 996.7X+1.945 7,r=0.999 9,说明大黄素进样量在0.025~0.25μg呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取同一供试品溶液,连续6次进样,测定峰面积积分值,计算RSD=0.72%。

2.7 稳定性试验

同一对照品溶液10μL,按上述色谱条件分别测定6次,每次间隔4 h,记录峰面积积分值,计算RSD=0.87%,结果显示溶液20 h内稳定。

2.8 重现性试验

取同一批号的供试品6份,依法制成供试品溶液进行测定,平均含量为1.12 mg·g-1,RSD=1.78%,结果表明重现性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的样品6份,分别精密加入一定量的大黄素对照品溶液,照含量测定方法测定,计算加样回收率,结果见表1。

2.10 样品测定

取20081101,20081104,20081209 3批样品,按供试品溶液制备项下方法制备,按上述色谱条件测定其中大黄素的含量,结果3批样品的大黄素含量分别为 1.18,1.12,1.24 mg·g-1。

表1 大黄素加样回收率

3 结论和讨论

大黄作为牛黄解毒片中用量最大的一味药,且其功能主治与牛黄解毒片相近,应该对其进行质量控制,本文选择大黄中主要活性成分大黄素作为指标成分进行含量测定,以求更好地控制牛黄解毒片的内在质量。

参照 《中国药典》2010年版收载的大黄药材中大黄素的含量测定方法[2],来确定本制剂大黄素含量测定的色谱条件和供试品制备方法。本方法相对简单、准确、重现性好,可为 《中国药典》提高本品种的质量标准提供依据和参考。

[1]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:566-567.

[2]国家药典委员会.中国药典.(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:22-23.

Determination of Emodin in Niuhuangjiedu Tablets by HPLC

GaoWeidong,Li Cuiling
(Foshan Institute for drug control,Foshan Guangdong528000,China)

Objective:A HPLC method was established for determination of emodin in Niuhuangjiedu tablet.Methods:A Hypersil C18column was used with methanol and 0.1%phosphoric acid solution(85∶15)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1at30℃ and the detector wavelength was 289 nm.Results:The relationship between the concentration and the peak area of emodin was good linear relation.The calibration curve of emodin was at the range of 0.025~0.25μg(r=0.999 9),and the average recovery was 97.25%and RSD=1.1%(n=6).Conclusion:The method was rapid,sensitive and accurate,and could be used for the quality control of this preparation.

HPLC;Niuhuangjiedu tablet;Emodin

*高卫东,E-mail:weidonggw@163.com

2010-04-08)

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