李安民

河南商丘市第五人民医院 商丘 476000

循环内皮细胞(circulating endothelial cell,CEC)是目前在活体内评价血管损伤的唯一的特异而直接的指标[1]。内皮细胞的损伤在脑梗死的发生发展过程中起重要作用。我们对60例ACI患者血清CEC进行检测,探讨其在缺血性脑血管病中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料全部病例均系2008～2010年首次发病2周内在我院住院的ACI患者。诊断标准是依据1996年全国脑血管病学术会议修订制定的标准,所有患均经CT或MRI证实。共60例,其中男 39例,女21例;年龄32～80岁。排除标准有：(1)近2个月内有感染史;(2)伴免疫性疾病;(3)伴血液系统疾病;(4)有严重的心、肝、肾疾病;(5)入院后有明显感染症状者;(6)伴有恶性肿瘤。对照组为年龄、性别相匹配的健康者,共20例,其中男14例,女6例;年龄34～79岁。按梗死灶大小进行分组,大梗死灶组最大梗死直径＞4.0 cm,中梗死灶组梗死直径1.5～4.0 cm,小梗死灶组最大梗死直径＜1.5 cm。

1.2方法ACI患者入院后,急性期患者于次日清晨,恢复期患者于第4周空腹取肘静脉血10 mL。健康对照组也按同样方法取肘静脉血 10 mL,取其中2 mL,1500 r/min,离心10 min,分离血清后-20℃保存备用。用 Hladovec等[2]建立的Percoll密度梯度快速一步分离法分离和计数CEC,分离步骤为：(1)将3.0 mL抗凝血以等量生理盐水稀释;(2)加人2.0 mL Percoll分离液后离心,取Percoll界面以上液体作为上层以及Percoll层液体1.0 mL作为中层;(3)将上层液体再次离心(2100 r/min,20 min),弃管中上清,加生理盐水0.5 mL。混匀后一起镜检;(4)在Olympus显微镜下计数。

用Iwata等[3]免疫荧光标记法进行鉴定,证实该细胞是CEC。具体操作步骤如下：(1)取上清液少许涂在玻片上,干燥后用甲醇固定5 min,用……