启明，辛国，朱国琪

(1.吉林省吉林中西医结合医院，吉林 吉林 132012；2.长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

药理研究

川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠血压、心肌ACE活性及心肌细胞直径影响的研究

启明1*，辛国2，朱国琪1

(1.吉林省吉林中西医结合医院，吉林 吉林 132012；2.长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

目的：探讨川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用以及对SHR心肌ACE活性、心肌细胞直径的影响。方法：将40只SHR大鼠随机分为5组：空白对照组，川牛膝醇提物高、中、低剂量组，依那普利组，每组8只。采用尾动脉测压法测量给药前及给药后2，4，6，8周SHR收缩压，在给药8周后，观测心肌ACE活性、心肌细胞直径的变化。结果：给药8周后，川牛膝醇提物明显降低了SHR血压，其中高剂量组的降压幅度与依那普利组比较无显著性差异，但中、低剂量组与依那普利组有显著性差异。同时川牛膝各组均能降低心肌ACE活性、影响心肌细胞直径。结论：川牛膝醇提物的降压作用与降低心肌ACE活性、影响心肌细胞直径有关。

川牛膝醇提物；血压；心肌ACE活性；心肌细胞直径

原发性高血压是以血压升高为主要临床表现伴或不伴有多种心血管危险因素的综合征，通常简称为高血压。高血压是多种心、脑血管疾病的重要病因和危险因素，影响重要脏器，如心、脑、肾的结构与功能，最终导致这些器官的功能衰竭，迄今仍是心血管疾病死亡的主要原因之一[1]。中药治疗高血压病不仅不良反应小，价格低廉，且是通过多靶点、多层次等途径降低血压。寻求有效的中医药治疗途径，对发挥中医药的整体调节优势有着十分重要的意义。

《素问·至真要大论》云：“诸风掉眩，皆属于肝”，而肝之风，本之火，火之本，在肝之气，正如王泰林《西溪书屋夜话录》中所云：“内风多火出，气有余便是火，余故曰肝气、肝风、肝火，三者同出异名。”三者皆为肝的病机，其根源在于肝之气血阴阳失调，关键在于肝气疏泄失常。王艳等[2]认为，肝失疏泄，气逆于上，是发生高血压病的重要原因。在临床上牛膝能“引血下行”，故临证重用川牛膝治疗“肝气上逆型”患者，取得了满意疗效。

陈红[3]在1996年用WX-6型多部位微循环显微仪和维多Fas-94型血流快测仪，对川、怀牛膝水煎液进行了小鼠肠系膜微循环、阏血型大鼠全血黏度、红细胞压积等指标的对比研究，结果发现在改善微循环方面，川牛膝作用强于怀牛膝。川、怀牛膝均能降低血浆黏度，怀牛膝高剂量降低全血黏度，川牛膝能增强红细胞变形能力[4]。基于上述研究成果，本研究旨在通过采用原发性高血压动物模型，进一步验证牛膝降血压的效果及作用机制。

1 材料与仪器

1.1 材料

川牛膝CyathulaofficinalisKuan饮片购自长春中医药大学附属医院，马来酸依那普利片(依苏)(扬子江药业集团江苏制药股份公司，批号06050102，规格：10mg/片)。

1.2 实验动物

自发性高血压大鼠(SHR)40只，雄性，12周龄，体重(265±20)g，清洁级，购自中国医学科学院实验动物研究所，许可证编号：SCKK(京)2005-0013。适应性喂养一周后进行实验。

1.3 仪器

大鼠尾压测定仪(BP-6型，成都泰盟科技有限公司)；紫外分光光度计；全自动脱水机、包埋机、切片机(德国徕卡)；显微镜(奥林巴斯)。

2 方法

2.1 川牛膝醇提物的制备

川牛膝10kg加8倍量水煎煮3次，时间分别为2，2，1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.12～1.15(24℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达60%，搅拌均匀，静置24h(4℃)，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35(80℃)的稠膏,相当于0.1g·g-1生药。

2.2 依那普利混悬液配制

取依那普利片10mg研为极细粉末，加蒸馏水36mL充分混匀，配成混悬液，每毫升含药量0.278mg，分装加盖，置4℃冰箱保存备用。

2.3 分组及给药

分组前先测量SHR的体重和血压，其体重和基础血压无明显的差异性，故将40只SHR随机分为5组，每组8只，每笼4只喂养，适应性喂养一周后进行灌胃给药，灌服量按体重计算，1mL·(100g)-1。给药时间为每天上午8时，实验期间各组均饲以高血压大鼠专用饲料，并自由饮水。实验过程中每周测量一次体重，依据体重调整给药剂量，实验周期为8周。高剂量组，每日分别按12g·kg-1灌服川牛膝醇提物；中剂量组，每日分别按6g·kg-1灌服川牛膝醇提物；低剂量组，每日分别按3g·kg-1灌服川牛膝醇提物(分别相当于人临床剂量的60,30,15倍)；阳性对照组，每日按0.278mg·mL-1灌服依那普利片(相当于人用剂量的16.65倍，与低剂量组倍比相当),空白对照组给予相同体积生理盐水。

2.4 观察指标

2.4.1 一般观察 包括进食、水量、体重、外观毛色、活动情况等。

2.4.2 测量血压值 使用BP-6型测压仪测量大鼠尾动脉收缩压，给药期间两周测一次血压，每次测3个值，取平均数。测量时间均选在上午灌药后1.5h进行。

2.4.3 生化指标(心肌ACE活性)及心肌细胞直径

2.4.3.1 心肌采集 给药8周后，于末次给药后给大鼠禁食12h，称重，麻醉，腹腔注射戊巴比妥钠30mg·kg-1麻醉后，迅速打开胸腔摘取心脏，用预冷的生理盐水充分灌洗，取左心室相同部位心肌组织200mg，-70℃保存，以备制备心肌组织匀浆用。取左心室相同部位100mg，用10%中性甲醛液固定，石蜡包埋，2μm切片，以HE染色。

2.4.3.2 心肌ACE活性检测 一个ACE活性单位为37℃下,每分钟每毫升组织匀浆液中ACE反应产生1nmol马尿酸。取左心室相同部位心肌组织200mg，用冷生理盐水冲洗，除去血液，滤纸拭干，在冰浴中剪成碎块，加组织块重量9倍的生理盐水制备10%心肌匀浆，再以3 000r·min-1离心10～15min，取适量上清液，根据试剂盒操作说明书用化学比色法检测ACE活性。原理及简单步骤是马尿酸甘氨酰甘氨酸在血管紧张素Ⅰ转化酶ACE的作用下水解成马尿酸及甘氨酰甘氨酸。用醋酸乙酯提取马尿酸，溶于氯化钠中，采用紫外分光法(γ=228)测定马尿酸量，从而间接测定心肌中ACE活性。

2.4.3.3 心肌细胞直径的测量 取左心室心肌组织常规固定、包埋、切片行HE染色。在HE染色下，采用Takemori等描述的方法测量心肌细胞的直径[6]每一标本随机取5个视野，取其均值作为该标本的值。

2.5 统计方法

3 结果

3.1 川牛膝醇提物对SHR血压的影响

3.1.1 治疗8周后的各组大鼠血压情况比较 结果见表1。治疗前，各组大鼠血压无显著差异，治疗8周后，川牛膝醇提物各剂量组及依那普利组均明显降低了自发性高血压大鼠的血压，各治疗组与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。

表1 各组治疗前及治疗后2，4，6，8周血压情况 /mmHg

注：(1)n=8；(2)与空白对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01

3.1.2 治疗4、8周后血压变化幅度比较 结果见表2。未经药物治疗的空白对照组血压逐渐升高，治疗4周时，依那普利组的降压幅度明显优于川牛膝各组(P<0.01)，治疗8周后各组大鼠血压的降低幅度比较，川牛膝高剂量组与依那普利组无显著性差异(P>0.05)，中、低剂量组与依那普利组有显著性差异(P<0.01)。

表2 治疗4、8周后血压降低幅度 /mmHg

注：(1)n=8；(2)与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与依那普利组比较，△△P<0.01

3.2 川牛膝醇提物对SHR心肌ACE活性的影响

结果见表3。

表3 各组大鼠心肌ACE活性 单位/(mL·mg组织)

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与依那普利组比较，△△P<0.01

3.3 川牛膝醇提物对SHR心肌细胞直径的影响

结果见表4。

表4 各组大鼠心肌细胞直径 /L·μm-1

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与依那普利组比较，△P<0.05，△△P<0.01

4 讨论与分析

SHR是一种遗传高血压模型，与人类的原发性高血压相似。现代研究[5]，原发性高血压的发病机理十分复杂而且不明确，是多因素、多层次共同作用的结果。肾素-血管紧张素系统(RAS)在高血压病的发生及发展中占有极其重要的地位，而该系统中的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能直接收缩血管，升高血压、调节自主神经、影响钙离子内流和刺激其他缩血管因子释放；此外，其长期作用可影响心肌内皮细胞功能和血管平滑肌细胞表型，在心室和血管的重构中起重要作用[4]。血管紧张素转换酶是一种二肽羧肽酶，广泛存在于人体各组织器官中。血管紧张素Ⅰ在转换酶作用下转变为血管紧张素Ⅱ，它有很强的生物活性，除引起小动脉收缩外，还能促使醛固酮的分泌及钠离子和水分的重吸收，使血容量增加和血压升高。ACE可使血管紧张素Ⅰ转变为血管紧张素Ⅱ，后者是一种强效收缩剂，可刺激肾上腺球状带细胞释放醛固酮，导致水钠潴流。另外，ACE还与缓激肽的降解有关，缓激肽作用于内皮β2-激肽受体，刺激NO产生，通过促进血管内膜平滑肌细胞增生、过多细胞间质形成及急慢性血管痉挛等多个环节，加速冠状动脉粥样硬化进程。心肌细胞是永久细胞，一般情况下不发生增殖或者增殖率极低。高血压左心室肥厚时，由于压力负荷增加、血液动力学改变、局部AngⅡ产生过多等因素作用，刺激某些凋亡基因活化凋亡相关蛋白的合成，使心肌细胞凋亡增加。Ravassa等[7]发现血管紧张素Ⅱ在SHR左心室肥厚中能显著诱导心肌细胞凋亡。凋亡导致心肌细胞丢失无法再生，机体通过一系列的调节，刺激成纤维细胞增殖，通过间质纤维化和胶原增加来维持心脏的结构，导致高血压心脏肥大。依那普利是口服有效的非肽类ACEI，可明显抑制血管紧张素I转化为血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)减弱Ang-Ⅱ介导的一切作用而产生降压等效果；亦可减少醛固酮的释放致水钠潴留减轻；抑制局部组织如肾脏、血管壁及脑内的血管紧张素转换酶等，从而阻断肾素-血管紧张素系统的作用，导致血压降低。其主要是通过对血管紧张素转换酶的抑制而实现的，实质是通过抑制血管紧张素Ⅰ转变为Ang-Ⅱ而降低血压，减少继发于高血压病的心、肾等血管病变的发生[8]。

[1] 陆再英，钟南山.内科学(第七版)[M].北京：人民卫生出版社，2008：251.

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[3] 陈红，石圣洪.中药川、怀牛膝对小鼠微循环及大鼠血液流变学的影响[J].中国微循环，2002，2(3)：182.

[4] 孙水平，李新华，孙曙光.怀牛膝的药理研究续报[J].河南中医，1985，5(1)：40.

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[7] Ravassa S，FortunoMA， Gonzalez A，et al. Mechanisms of increased susceptibility to angiotensin II-induced apoptosis in ventricular cardiomyocytes of spontaneously hypertensive rats[J]. Hypertension，2000，36(6): 1065-1071.

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[9] OVP-维德出版社.维德临床用药年鉴[M].香港：中信出版社,德国OVP-维德出版社,1998：240.

ResearchaboutEthanolExtractofCyathulaOfficinalisKuanonSpontaneouslyHypertensiveRat(SHR)′sPressureandtheInfluenceontheActivityofCardiomyocyteACEandTransdiameterofCardiomyocyte(TDM)oftheSHR

Qi Ming1, Xin Guo2, Zhu Guoqi1

(1.JilintraditionalChineseandWesternMedicineCombinationHospitalofJilinProvince,JilinJilin132012,China; 2.ThefirstAffiliatedHospitaltoChangchunUniversityofChineseMedicine,ChangchunJilin130021,China)

Objective: To explore the hypotensive effect of ethanol extract of Cyathula officinalis kuan on Spontaneously hypertensive rat(SHR)and the influence on the activity of the cardiomyocyte, and transdiameter of cardiomyocyte(TDM)of the SHR.Methods: randomly divide 40 SHRs in to 5 groups: blank control group, the high, middle, low dose of ethanol extract of Cyathula officinalis kuan and enalapril. Each grou Phas 8 SHRs. Measure the systolic pressure of the SHR of 2,4,6,8 weeks respectively both before and after drug administration with the tail-artery blood pressure measurement. 8 weeks after drug administration, observe the activity of the cardiomyocyte ACE, and the TDM of the SHR.Results: 8 weeks after drug administration, ethanol extract of Cyathula officinalis kuan decreases the blood pressure of the SHRs obviously. The lowering range of the blood between the high dose grou Pand the enalapril grou Pshows no significant difference while the middle and low dose grou Pand enalapril grou Pstill significant difference. Meanwhile, each grou Pof Cyathula officinalis kuan can reduce the activity of the cardiomyocyte, and TDM of the SHR.Conclusion: the hypotensive effect of ethanol extract of Cyathula officinalis kuan is relevant with the reduction of the activity of the cardiomyocyte, and the TDM of the SHR.

Ethanol extract of Cyathula officinalis kuao; Blood pressure; The activity of the cardiomyocyte ACE; TDM

*启明，Email：qiming629@yahoo.com.cn

2009-12-07)