高鹏

苦参素(matrine)是从豆科植物苦参的干燥根中提取分离精制而得的白色结晶性单体粉末。已有研究表明苦参素具有抗炎、免疫调节、减轻肝脏炎症活动、抑制肝内胶原合成及抗纤维化作用[1-2]。本实验通过大鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型，探讨苦参素对缺血再灌注肝脏细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 实验药物与试剂 苦参素注射液购于江苏正大天晴药业股份有限公司，产品批号0511101。Bcl-2、Bax和Caspase-3免疫组织化试剂盒购自武汉博士德生物技术公司。

1.2 动物分组与模型建立 8～10周SD大鼠30只，♀♂不限, 体重200～250克。随机分为空白对照组(S组)、缺血再灌注+生理盐水组(I/R组)、缺血再灌注+苦参素注射液组(M组)，每组10只。大鼠于术前禁食12h,自由饮水。腹腔注射20%乌拉坦0.6ml/100g麻醉后，仰卧位固定，行颈部正中切口，钝性分离出一侧颈内动脉，插管以备取血。然后在剑突下行正中腹部切口3～4cm，打开腹腔，暴露肝门，用无损伤血管钳夹闭门静脉、肝动脉造成全肝缺血30min后，松夹恢复血流再灌注2h。S组和I/R组于术前30min分别经股静脉输注生理盐水2ml/100g，而M组于术前30min经股静脉输注苦参注射液2ml/100g。术毕处死, 取肝组织置于4%甲醛溶液中固定。

1.3 指标检测及方法 HE观察组织超微结构改变：取肝组织左叶剪成0.5cm×0.3cm×1.0cm置于4%甲醛溶液中固定24h后，经梯度酒精脱水，二甲苯透明后，切成4～6um的切片，HE染色，中性胶封固，显微镜观察。

Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达检测:石蜡切片经脱蜡水化后,滴加3%H2O2灭活内源性酶, 双蒸水漂洗3次后,进行热修复抗原、滴加抗原修复液Ⅰ和正常山羊血清……