袁静 李凯

1971年Folkman教授提出了抗血管生成治疗理论[1]，即肿瘤生长依赖新生血管，阻止其生成可阻断肿瘤营养供应。近年来，一些抗血管生成药物和化疗联合取得了较好疗效，但两种药物的各自特点比较、联合时的最佳用药顺序及分子机制等仍为亟待阐明的问题。本研究以荷瘤鼠为动物模型，采用重组人血管内皮抑素（恩度，rh-endostatin endostar）和多西紫杉醇（docetaxel）进行干预，通过观察瘤组织基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）及其调控指标变化以及瘤组织微血管密度（microvessel density, MVD）和瘤体生长，对该问题进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及癌细胞株 BALB/c-nu/nu小鼠购自北京维通利华公司，4周龄-5周龄，雌性，体重16 g -18 g，于无菌条件下饲养。人肺癌A549细胞株由天津医科大学肿瘤医院免疫实验室惠赠。

1.1.2 药物和试剂 重组人血管内皮抑素由先声药业提供，批号：20081004。多西紫杉醇，由江苏恒瑞医药股份有限公司提供，批号：08082311。基质金属蛋白酶及其抑制剂、诱导剂染色所用一抗均购自Santa Cruz公司，CD34抗体购自Abcam公司。二抗及DAB等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养方法 A549细胞传代培养于RPMI-1640培养液中，37oC、5%CO2条件下贴壁生长。

1.2.2 小鼠移植瘤模型的建立 调整细胞悬液浓度为5×107个/mL，于小鼠腹股沟皮下注射0.1 mL/只。待瘤体大于150 mm3时，剪成直径2 mm的小块，接种至小鼠左侧腹股沟皮下形成移植瘤。

1.2.3 动物分组与给药 第一阶段：接种10天、成瘤体积达到要求后将实验小鼠随机分成2组，8只/组，配制好的多西紫杉醇以注射用水稀释后腹腔注射，重组人血管内皮抑素以生理盐水稀释后于移植瘤对侧皮下注射给药。……