杨玉琴,冯洁,王学斌,谢建云,高诚,胡建华

(1.复旦大学,上海 200032;2.上海实验动物研究中心,上海市实验动物监督检验站,上海 201203; 3.上海市计划生育科学研究所,上海 200032;4.扬州大学动物科学与技术学院,扬州 225009)

研究报告

东方田鼠三个脂肪肝相关基因的克隆及分析

杨玉琴1,冯洁2,3,王学斌4,谢建云2,3,高诚2,胡建华2

(1.复旦大学,上海 200032;2.上海实验动物研究中心,上海市实验动物监督检验站,上海 201203; 3.上海市计划生育科学研究所,上海 200032;4.扬州大学动物科学与技术学院,扬州 225009)

目的 克隆CYP2E1、CYP2D 5、ECHS1三个与非酒精性脂肪肝可能相关基因的cDNA全长基因,为进一步研究非酒精性脂肪肝的发病机制提供依据。方法利用S MART技术构建东方田鼠肝脏cDNA质粒文库,通过PCR方法筛选文库,获得目的菌落,用pB luescrip t II SK通用引物M 13R测序,获得基因全长序列,并进行序列分析比较。结果筛选了CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个基因,并获得了它们的全长cDNA序列:CYP2E1基因cDNA全长为1685bp,有1482 bp的完整开放阅读框,编码494个氨基酸;CYP2D 5基因cDNA全长为1690 bp,有1514 bp的完整开放阅读框,编码504个氨基酸;ECHS1基因cDNA全长为1013 bp,有873 bp的完整开放阅读框,编码290个氨基酸。这三个基因的核酸序列及其推测的氨基酸序列与人、大小鼠序列高度同源。结论获得了东方田鼠CYP2E1、CYP2D 5、ECHS1三个基因全长cDNA序列,并已在Genbank中登录(GQ507485、GQ507486、GQ845171),为东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的研究奠定了基础。

东方田鼠;cDNA序列;非酒精性脂肪肝

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以无过量饮酒史(酒精摄入量< 20 g/d)以及肝细胞脂肪变性、气球样变、弥散性肝小叶轻度炎症和(或)肝中央静脉、肝窦周围胶原沉积等为临床病理特点的慢性肝脏疾病[1]。近年来,由于饮食结构的变化,非酒精性脂肪肝的发病率呈逐年上升趋势,统计结果显示脂肪肝患者已占到平均人口的10%～24%。脂肪肝已成为仅次于病毒性肝炎的第二位常见肝病,在发达国家已成为第一位常见肝病,且有发展至肝硬化、肝癌、肝衰竭的危险[2],成为全球普遍关注的医学问题和社会问题。但非酒精性脂肪肝的发病机制至今尚未明确,目前认为非酒精性脂肪肝病变的产生是多基因共同参与的结果。

细胞色素P450是位于滑面内质网上的一组混合功能氧化酶系,是肝脏代谢最主要的酶系……