朱载华，孙莉，陈丹，张乾坤，嘉婷，邹正平，朱小春

(温州医学院附属第一医院 风湿免疫科，浙江 温州 325000)

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是常见的自身免疫性疾病，目前尚无根治方法，其发病机制尚未完全清楚，目前认为表观遗传学机制，特别是DNA甲基化在系统性红斑狼疮的发病机制中起了非常重要的作用。三氧化二砷（ATO）作为我国中药砒霜的主要成分，在临床上用于治疗急性早幼粒细胞白血病取得一定疗效[1]，且已有研究证实，ATO能下调MRL/lpr狼疮小鼠FasL、IFN-γ、自身抗体、RF等水平，抑制淋巴组织增生、皮肤损害、肺和肾脏的炎性浸润、肾脏的免疫复合物沉积并延长MRL/lpr狼疮小鼠生存时间[2]。本课题组亦有研究证实ATO能降低BXSB小鼠血清中抗dsDNA水平，抑制肾小球中IgG的沉着，延长狼疮鼠的生存时间[3]。鉴于DNA甲基化在SLE的发病机制中的重要作用及ATO对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用，本研究将讨论ATO对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平的影响，从遗传学的发病机制方面为ATO治疗SLE提供重要的依据。

1 材料和方法

1.1 药物和试剂 ATO、5-氮杂胞苷（5-AzaC）和植物血凝素P（PHA-P）均为Sigma公司产品；白介素-2（IL-2）为上海华新生物高技术有限公司产品；RPMI 1640和胎牛血清（FCS）为Gibco公司产品；淋巴细胞分离液为天津市灏洋生物制品科技有限责任公司产品；Dynal Mouse CD4 Nega-tive Isolation Kit为挪威Dynal公司产品；流式相关的大鼠抗小鼠TH细胞IgG-FITC为eBioscience公司产品；基因组DNA小量抽提试剂盒和质粒小量抽提试剂盒均为碧云天生物技术有限公司产品；DNA 甲基化试剂盒和DNA凝胶回收试剂盒为ZYMO公司产品；PCR试剂盒、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖（X-Gal）均为大连宝生物工程有限公司产品；……