谈忠鸣,汤奋扬,陈 萍,钱慧敏

江苏省1例布鲁氏菌病的实验室检测及分子分型

谈忠鸣1,汤奋扬1,陈 萍2,钱慧敏1

目的利用免疫学抗体检测及分子分型,确诊1例临床疑似布鲁氏菌病病例。方法 虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测血清中抗体,PCR方法及测序技术检测布鲁氏菌特异基因。结果 病人血清中抗体阳性,疑似菌株经PCR鉴定为羊种布鲁氏菌。结论 此次感染者之病原体为羊种布鲁氏菌。

布鲁氏菌病;羊种布鲁氏菌;血清学;PCR;分子分型

2009年7月江苏某医院收治1例疑似布病患者,为尽快查明病因对症治疗,该院进行了分离培养,并将疑似致病菌株及病人血液送本中心鉴定,本中心运用PCR快速方法6h检测出结果并将结果反馈医院,现将实验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 血清取自病人,菌株由医院检验科从病人血液中分离,送本中心后转种血平板,置37℃温箱中培养(双份培养其中1份置于5%CO2环境中)。

1.2 试剂 TaKaRa LA Taq酶、dNTPs购自宝生物工程(大连)有限公司,PCR扩增引物由上海生工生物技术有限公司合成,布鲁氏菌虎红平板凝集试剂和试管凝集试剂购自中国疾病预防控制中心流行病研究所布病室。

1.3 鉴定步骤 所有活菌操作均在P2+实验室中进行。

1.3.1 血清抗体检测 取10μ L虎红平板凝集试剂和10μ L病人血清在玻片上混匀,2min内观察结果。试管凝集试验步骤按照试剂说明书操作。

1.3.2 PCR检测 从平板上挑取疑似菌落,煮沸法制备DNA模板。普通PCR检测布氏杆菌BCSP31基因(中国疾病预防控制中心布病室提供),此基因是一种免疫原性膜蛋白基因,具有高度的特异性和同源性。……