肿瘤细胞血管外游走状况的初步探讨

杨 斌1,辛 华1,韩春山1＊,曲俊海2
(1.吉林大学中日联谊医院胸外科,吉林长春130033;2.洮南市医院 外三科)

*通讯作者

肿瘤血行转移是一个多步骤的、复杂的生物学过程,其中肿瘤细胞向血管外游走是血行转移的关键环节,是肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用的过程[1,2]。我们在体外构建了肿瘤细胞的血管外游走模型,对肿瘤细胞的血管外游走状况进行初步研究。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 本研究所用细胞均引自日本JCRB Cell Bank。

1.1.1 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养 细胞培养皿明胶包被,将1%明胶加入细胞培养皿内,37℃放置30 min。除去1%明胶,将0.5%戊二醛加入细胞培养皿内,室温放置30 min。用PBS溶液洗涤细胞培养皿3次。将0.1 M甘氨酸加入细胞培养皿内,室温放置10 min。用PBS溶液洗涤细胞培养皿3次,待用。HUVEC生长在上述包被有明胶的细胞培养皿上,使用M199细胞培养液,在37℃恒温、含5%CO2的CO2孵箱内培养。

1.1.2 肿瘤细胞培养 纤维肉瘤细胞HT1080、肺腺癌细胞VMRC-LCD、胰腺癌细胞 CaR-1均使用DMEM细胞培养液;在37℃恒温、含5%CO2的CO2孵箱内培养。

1.2 HUVEC单细胞层的制备

1.2.1 胶原凝胶层的制备 胶原混合溶液A液:Cellmatrix Type I-P(日本新田ゼラチン株式会社);B液:不含NaHCO3的M199细胞培养液;C液:内含2.2%NaHCO3、200 mMHEPES的0.05 N NaOH 溶液 。将胶原混合溶液A 液、B液、C液按8∶1∶1的比例在冰上充分混合,取出混合液200 μ l加入直径为12 mm的细胞培养皿内,37℃放置30 min后胶原混合溶液凝固为凝胶状,即制成胶原凝胶层。

1.2.2 在胶原凝胶层表面培养HUVEC 将400 μ l M199细胞培养液(内含3×104HUVEC)加入预先制成胶原凝胶层的细胞培养皿内,培养1周。

1.2.3 利用吉姆萨染色确认HUVEC充分融合 随机取出培养有HUVEC的细胞培养皿,除去培养液。……