李慧萍,姚兴伟,郭 楠,杨曦明

(北京中医药大学第一临床医学院检验科,北京 100700)

影响启动子活性测定的关键影响因素

李慧萍,姚兴伟,郭 楠,杨曦明*

(北京中医药大学第一临床医学院检验科,北京 100700)

目的探讨载体、质粒转染剂量、启动子长度、细胞系以及检测仪器等因素对启动子分析实验的影响。方法采用化学发光法测定荧光素酶,EGFP荧光强度采用流式细胞仪。以上检测每组样品均设三复孔,并重复两次,所得结果进行t检验。结果选择不同的报告基因、载体、质粒转染剂量、启动子长度和细胞系得到不同的结果。结论载体、质粒转染剂量、启动子长度、细胞系的选择会对启动子分析的结果造成很大的影响,因此,在进行启动子分析前,应综合考虑上述因素,以达到更好的实验效果。

启动子;报告基因;荧光素酶;绿色荧光蛋白

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1017)

真核基因的启动子是指RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件,它包括至少一个转录起始点以及一个以上的功能组件,这其中比较典型的有TATA盒(TATAAAA)、CAAT盒(GCCAAT)以及GC盒(GGGCGG)等。它位于基因翻译区的上游,属于调控基因表达的区域,通过启动子上的元件与对应该元件的转录因子的相互作用,精确调控着下游基因的转录,因此,启动子分析是转录调控研究中一种十分常用的技术,该项技术具有灵敏度高、实验周期短,可重复性强等特点。

1 材料与方法

1.1 细胞系 人胚肺二倍体成纤维(2BS)细胞,由卫生部北京生物制品研究所建株。30代以下为年轻细胞,55代以上为衰老细胞;HeLa、MCF-7细胞为本室冻存。……