李志士,梁海英,于天华

(1.长春中医药大学附属医院,吉林长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院输血科)

DNA微列阵技术检测戊型肝炎病毒方法的建立及初步应用

李志士1,梁海英2,于天华2

(1.长春中医药大学附属医院,吉林长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院输血科)

目的建立DNA微列阵技术检测戊型肝炎病毒方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。方法通过生物医学数据库戊型肝炎病毒基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证,建立了戊型肝炎病毒DNA微列阵技术检测方法。结果试验所设计的探针仅与HEV的PCR产物杂交呈阳性,与乙肝、丙肝等对照病毒的PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,该方法比同巢式PCR方法检测戊型肝炎病毒敏感度要高,用该方法检测了长春地区50份疑似HEV临床病料,38份阳性;而用巢式PCR法扩增HEV ORF1基因确诊为阳性的只有35份。结论利用DNA微列阵技术检测戊型肝炎病毒方法,特异性和敏感性强,可作为HEV临床标本检测方法。

戊型肝炎病毒;核酸探针;检测

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0996)

目前戊型肝炎病毒的检测方法主要包括两大 类:一是即就用基因工程重组抗原建立的抗体诊断方法,其诊断手段主要是采用间接ELISA方法检测血清中的抗体;另一类是采用RT-PCR为基础建立的基因诊断方法,其诊断手段主要是利用RT-nPCR检测病毒RNA。本文应用DNA微列阵技术检测戊型肝炎病毒[1],现报道如下。

1 材料与方法

1.1 酶及主要试剂

Taq DNA聚合酶购自上海生工……