府晓丹，于波，李阳，姜振环，杨滢，孟亮

（中国医科大学 附属第一医院心内科，沈阳 110001）

严重的心率失常可致晕厥、猝死等，安装电子起搏器是这类患者的主要治疗手段。近年来，随着我国心脏疾病人数的逐年增加和人们对生活质量要求的不断提高，需要安装电子起搏器的人数每年都在递增。但电子心脏起搏器在长期应用过程中，存在电池寿命短、易发生感染、不能完全模拟正常心跳顺序等缺点。为弥补上述缺陷，应用基因工程构建生物起搏器的研究便应运而生。位于窦房结及心房区心肌细胞膜上的乙酰胆碱敏感钾通道与心动过缓有关，该通道主要由Kir3.1基因编码，本研究旨在筛选能够抑制Kir3.1的siRNA，应用RNA干扰的方法抑制Kir3.1蛋白的表达，以期为进一步的实验研究提供技术性依据。

1 材料与方法

1.1 材料

雄性Wistar新生大鼠40只（中国医科大学实验动物中心提供）。高糖DMEM细胞培养基（Hyclone公司），胰蛋白酶（Sigma公司），Trizol和脂质体转染试剂 LipofectamineTM2000（Invitrogen公司），Real-time PCR试剂盒及PCR扩增引物（北京天根生物有限公司），兔抗鼠Kir3.1多克隆抗体（Santa Cruz公司），辣根酶标记山羊抗兔抗体（北京中山公司），小鼠抗大鼠β-actin抗体（Sigma公司），辣根酶标记兔抗小鼠抗体（北京中山公司），PVDF膜（Millipore公司），siRNA由上海吉玛制药有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养和转染：采用低浓度的胰酶和Ⅱ型胶原酶联合消化，并采取2次差速贴壁法纯化心房肌细胞。在37℃、5%CO2的培养箱中用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基中培养新生SD大鼠心房肌细胞，细胞悬液以2 ml/孔接种于6孔板中，48 h后细胞融合可达到80%左右。……