刘玉书，祁振坤，曹占明，孔凡涛，刘鲲鹏

（1.蓟县林业局，天津 蓟县 301900；2.蓟县国营苗圃，天津 蓟县 301900）

美国白蛾核型多角体病毒，属杆状病毒科，核型多角体病毒属Ⅰ型，是美国白蛾的天然病毒体，是美国白蛾的克星，为了获得一定数量的病毒用于防治，2007～2009年我们在国营青甸苗圃、小屯苗圃连续进行了七次病毒增殖工作，摸索了一套简单有效的病毒增殖方法。

1 增殖病毒场地选择及养虫台的搭建

1.1 场地选择

一是病毒增殖场地要选在交通方便地区；二是周围要有充足的天然或人工栽植的植物饲料；三是增殖室要求面积不低于100 m2，通风透光，封闭性好，有照明设施；四是室内或附近有水源，方便配制病毒药液，便于进行病毒增殖工作。

1.2 搭建病毒增殖平台

在增殖室内搭建幼虫养殖平台进行病毒增殖，可使单位面积使用效率倍增，有利于添加饲料，有利于幼虫生长发育，便于感染病毒死虫的收集。

1.2.1 材料与工具

搭建平台的材料有：竹竿（粗1.5～2 cm）、塑料布条、挷丝；工具有：剪刀、盒尺、钳子、钢锯。

1.2.2 搭建平台规格

病毒增殖平台呈立体梯形。高100 cm，长因地制宜而定，上宽80 cm、下宽85 cm。分上下两层，下层距地面15 cm。增殖室内可搭几个平台，平台之间留宽1 m的工作道。

2 采集美国白蛾幼虫

2.1 采虫工具及方法

剪枝手剪、高枝剪、装虫袋子、扎口绳。根据养殖幼虫数量，确定采虫人员及工具。

2.2 采虫时期

用于病毒增殖的美国白蛾幼虫龄期应在2～2.5龄为宜，偏早或偏晚都会影响病毒增殖工作的质量，幼虫采集工作应在1～2 d内突击完成。

2.3 采虫包装及运输

采虫时随采随装，剪掉粗1 cm以上的枝条并去掉无虫枝叶，自然装满为好，扎紧袋子口，存荫凉处。运输时间尽可能缩短，到达病毒增殖场地立即将虫枝取出，以免采集的幼虫窒息死亡。

3 病毒接种

3.1 增殖室温湿度要求

病毒增殖室温度在25℃左右；相对湿度70%～85%最为适宜。如温度低于10℃以下，虫体僵硬而死，核型多角体病毒含量低，此时应采取增温措施。

3.2 幼虫摆放密度

运输到增殖地的美国白蛾幼虫要及时摆放到增殖室平台上，做到虫体分布均匀，合理密度为 3 500头/m2。

3.3 病毒接种时期及浓度

按合理的密度摆放幼虫，立即向幼虫体及叶片上喷施病毒液 （接种病毒），使其尽快感染病毒，尽可能缩短病毒增殖的时间。幼虫接种病毒理想的浓度为美国白蛾核型多角体病毒1 000万个/ml。每天早晚两次连喷3 d即可。

3.4 增殖用白蛾幼虫的喂养

增殖用美国白蛾幼虫需注意添加食料，食料为新鲜的枝叶，一般需喂养15～18 d。根据虫口密度，决定喂食数量及次数。

4 致病死虫的收集与保存

接种病毒7 d后，个别龄期小的幼虫开始死亡，这时要及时捡拾致病死虫，并收集保存。接种病毒10 d后，死虫开始进入高峰，自然致死虫内核型多角体病毒含量高、质量好，所以不死的幼虫暂不捡。幼虫接种病毒17 d后的活虫可全部收捡。致病死虫收集工作完成后，收集容器密封，于0～4℃下保存，待提取病毒。

5 清理增殖室

在白蛾病毒增殖过程中，要时刻保证增殖室在封闭状态，防止白蛾幼虫逃逸，病毒增殖工作结束后，及时清理室内枝叶，并销毁。

6 病毒的提取与贮存

6.1 病毒液的提取

将低温保存的虫尸在研磨破碎前3 d放入容器加适量无菌水，以淹没虫尸为宜。用匀浆破碎机研磨粉碎，研磨时加入少量水，避免产生高温。匀浆液用120目的纱网过滤，过滤出的残渣进行二次研磨，再用同样纱网过滤，即成为美国白蛾多角体病毒液。

6.2 病毒液浓度的检测

取混合均匀的病毒原液1 ml，稀释1 000倍后，用血球计数板在电子显微镜下计数，计数时在计数板一个视野里见到的病毒量太少（每视野低于5个），可再降低稀释倍数；反之，提高稀释倍数（每视野多于20个）。

病毒浓度=（80 小格内数量÷80）×400×104×稀释倍数

6.3 病毒悬液的保存

病毒悬液在密闭容器中0～4℃保存，在用于防治时按照施用浓度兑水配置即可。