猴源人隐孢子虫的分离与鉴定
2010-08-06徐前明程家林李国清叶亦见梁详解岳彩玲高振勇
徐前明,程家林,李国清*,叶亦见,梁详解,岳彩玲,高振勇
(1.华南农业大学兽医学院,广东广州510642;2.中国科学院广州生物医药与健康研究院,广东广州510663)
隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫感染而引起的以腹泻为主要临床表现的一种人兽共患原虫病。隐孢子虫可感染大多数脊椎动物,包括人类,免疫正常的个体感染后引起自限性腹泻,在免疫功能受损的患者则引起渐进性致死性腹泻。目前,公认的隐孢子虫有18种[1]。关于灵长类包括猴在内感染隐孢子虫已见报道,但虫体的分类地位尚未明确[2]。Xiao等从猴体内发现一株人隐孢子虫(Cryptosporidium hominis),并对该虫的部分基因进行了研究[3]。在关于隐孢子虫种和基因型与宿主关系的阐述中,Xiao和Ryan进一步明确了C.hominis可以感染灵长类动物,说明C.hominis可以感染猴,至于猴的品种与C.hominis存在何种相关性有待于进一步确定[1]。本研究以恒河猴(Macaca mulatta)为研究对象,对其感染的隐孢子虫进行了分离和鉴定,旨在探明感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的C.hominis之间的遗传差异,以便更好地控制C.hominis由灵长类动物传播给人或相互传播途径,为防治该病提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物与虫株 恒河猴来自广东省灵长类实验动物中心的实验用猴。隐孢子虫虫株是从恒河猴粪便中采用蔗糖漂浮法分离而得。
1.2 主要试剂 EXTaq酶、M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit、pMD18-T载体质粒系统均为TaKaRa公司产品;蛋白酶K购自Merk公司;蛋白胨和酵母浸出物购自OXOID公司;氨苄青霉素、Tris碱和十二烷基硫酸钠(SDS)购自广州美津生物技术有限公司;……
