莪术油葡萄糖注射液的 HPLC指纹图谱研究

2010-07-12方洪壮孙长海刘利成李百强

黑龙江医药科学 2010年5期

李睿,方洪壮,孙长海,张宇,刘利成,李百强

(1.黑龙江成功药业有限公司,黑龙江哈尔滨 150025;佳木斯大学药学院,黑龙江佳木斯 154007;2.哈药集团生物工程有限公司,黑龙江哈尔滨 150020;3.黑龙江省药品不良反应监测中心,黑龙江哈尔滨 150076)

莪术油葡萄糖注射液是一种中药抗病毒制剂,收载于2005版的中国药典二部,用于治疗小儿病毒性肺肺炎[1]。HPLC方法控制莪术油葡萄糖注射液的质量,仅见部分有效成分的测定[2～4],缺少色谱指纹图谱的研究。基于 HPLC方法可免除由于大量的表面活性剂的存在而引起的相当困难的前处理过程[5],高沸点倍半萜类含氧衍生物,能得到较短的分离时间以及较高的柱效,采用 HPLC建立莪术油葡萄糖注射液的指纹图谱研究,结果表明,方法简便、可靠、重复性好,可作为莪术油葡萄糖注射液质量控制的标准。

1 实验材料

1.1 样品来源

提取莪术油用的药材均购于温莪术 GAP种植基地瑞安市陶山镇沙洲村,经佳木斯大学药学院生药教研室宗希明老师鉴定为温莪术。注射液10批,按照莪术油葡萄糖注射液制剂工艺要求制成。

1.2 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪(美国 Agilent公司),吉马酮对照品 (中国药品生物制品检定所,批号为10753-200212);莪术二酮对照品(上海沪云医药开发有限公司,质量分数为98%);莪术醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号为0080-20050521);乙腈、甲醇为色谱纯,磷酸为分析纯。依地酸二钠、吐温-80(注射用)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Zorbax Eclipse XDB-C18分析柱 (250mm× 4.6mm ID,5μm),Eclipse XDB C18保护柱 (12.5mm× 4.6mm ID,5 μm),自动进样器;检测波长210nm,柱温为30℃,流动相为乙腈(A)和1‰磷酸水溶液 (B)。A相浓度洗脱梯度：0min,55%;5min,55%;30min,75%;45min,90%;55min,90%,流速1mL/min。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取莪术二酮、莪术醇、牛儿酮对照品适量,另精密吸取 β-榄香烯对照品适量 ,用甲醇制成4种对照品浓度分别为 0.2mg/mL、0.025mg/mL、0.1mg/mL、0.2μL/mL的混合溶液,作为对照品混合溶液。

2.3 空白溶液的制备

取 0.18g的吐温80,再加入0.25mg依地酸二钠,用葡萄糖溶液定容至50mL容量瓶中,作为空白溶液。

图1 注射剂、对照品及空白溶液的指纹图谱

2.4 测定方法

分别吸取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液各20 μL,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,取续滤液进样。结果见图1。空白溶液对莪术油葡萄糖注射液的指纹图谱的检出无干扰。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度

同一供试液,连续进样 5次。所得到指纹图谱的与其中位值的相关系数分别为 0.9972、0.9995、0.9981,0.9997和0.9955,相关系数均大于0.9970,各图谱能够很好的重合 ,表明仪器的精密度较好。

2.5.2 稳定性

同一供试液 ,分别在0、4、8、12,18及 24h进样。不同时间测得的图谱与其均值相关系数分别为 0.9989、0.9958、0.9981、0.9995,0.9940和 0.9904,均大于 0.9940,样品在 24h内较稳定。

2.6 共有模式建立

取莪术油葡萄糖注射液7批,按上述色谱条件检测,确定了9个特征峰构成莪术油葡萄糖注射液的指纹图谱,共有模式图见图2。图中,2号峰为莪术二酮,4号为莪术醇,6号为吉马酮,8号为β-榄香烯。对所得到 HPLC指纹图谱进行共有图谱拟合,中位数法共有模式的相关系数为0.9701,0.9456,0.9711,0.9388,0.9804,0.9959,0.99632。均值法共有模式的相关系数为0.9774,0.9593,0.9790,0.9515,0.9722,0.9881,0.9940。采用相似度对其余3批注射液进行相似度评价,中位数法相关系数为0.9464,0.9240,0.9661;均值法相关系数为0.9569,0.9212,0.9607。