郭俊俊

0 引言

人工合成色素作为食品添加剂的一类，主要来源于煤化工及其附属产品，其相对于天然色素具有资源丰富，价格低廉，着色稳定的优势，在食品工业中被广泛应用，但其一般具有毒性，甚至可能致癌。为此，国家出台了相关法规和标准来规范合成色素等食品添加剂的使用。胭脂红作为合成色素的一种被许多生产果单皮的食品企业使用，国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》规定了其检测方法，但因其在样品前处理的描述上笼统，故针对性、操作性不强。本文就果单皮样品的前处理，提出了用超声波萃取，高速离心机分离来代替聚酰胺分吸脱附的提取方法，该方法的相关指标可以满足《食品中合成着色剂的测定》中对检测技术指标的要求。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters1525高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters2487紫外检测器；T25B组织匀浆机（德国Ika公司）；MSIMinishaker旋涡混合器；KQ-500E型超声波仪（昆山市超声波仪器有限公司）；TGL16M型台式高速冷冻离心机（长沙湘智离心机仪器有限公司）；BS224S型电子天平（塞多利斯科学仪器有限公司）。

胭脂红标样（国家标准物质中心）；甲醇、乙酸铵为色谱纯；氨水为分析纯度；水为高纯水。

1.2 实验步骤

（1）把样品用组织匀浆机捣碎混匀，称取10.000g置于50mL具塞试管中，加入50mL水，置于旋涡混合器上5min混匀。

（2）将装有样品的试管置于KQ-500E型超声波仪内超声萃取25min。

（3）待样品超声萃取完成后将装有样品的试管置于TGL16M型台式高速冷冻离心机上，以10000转/min的速度，常温离心分离20min。

（4）取出试管，用取样器吸取上清液，过0.45μm膜，准备进液相色谱仪进行检测。

（5）用标准储备液体，加水稀释20倍，经0.45μm膜过滤，配制成50.0μg/mL的标准使用液。

1.3 Waters1525高效液相色谱仪的实验条件

柱：Waters-C1810μm不锈钢柱4.6mm×250mm。流动相：甲醇：乙酸铵（pH=4，0.02mol/L）。梯度洗脱：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%继续 6min。柱温：35℃。流速：1mL/min。紫外检测器：254nm波长。

2 结果与讨论

2.1 样品的前处理

国标《食品中合成着色剂的测定》中规定的前处理方法是，样品粉碎，用水溶取样品中的色素，溶取液在酸性条件下，用聚酰胺吸附，用布式漏斗过滤，再用乙醇-氨水混合液洗脱。在实际操作中，由于果单皮经组织匀浆机处理后的水溶液近似胶体溶液，很容易和聚酰胺吸附相互作用而致使聚酰胺的有效吸附性降低，并且经布式漏斗过滤难度很大，即使勉强过滤，在用乙醇-氨水混合液洗脱时，由于乙醇对聚酰胺有一定的溶解性，也会导致过滤时空隙性差，加大过滤难度，并且对色素的提取效率影响很大。改用本方法后，避免了聚酰胺吸附、脱附，乙醇-氨水混合液洗脱，布式漏斗过滤等操作性不强的步骤，通过高速冷冻离心来使溶取液中的大分子物质离心沉淀，从而使溶取液达到进液相色谱仪的条件。实验证明，该方法在样品的前处理上简便、快速、有效。

2.2 检测数据和结果分析

2.2.1 检测数据（见表1）

表1 检测数据表

由数据分析：4个平行样结果的相对标准偏差为RSD=0.08%，并且在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值小于算术平均值的10%，该方法符合相关标准要求。2.2.2 方法的回收率和精密度（见表2）

表2 方法的回收率和精密度表

由数据分析：该方法的加标回收率在91±0.4%-108±0.8%之间，相对标准偏差 RSD（%，n=4）=0.08%，符合相关标准要求。

2.3 结论

该方法相对《食品中合成着色剂的测定》中规定的前处理方法简便、快速、有效。方法的各项技术指标满足标准要求，精密度为：RSD（%，n=4）=0.08；方法回收率为 91±0.4%-108±0.8%。

[1]GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定[S].

[2]GB/T 22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法[S].