袁 丽, 叶 健, 姜成涛, 张丰收

(1.中国人民公安大学,北京 100038;2.中国政法大学证据科学教育部重点实验室,北京 100088;3.公安部物证鉴定中心,北京 100038;4.江西省九江市公安局,九江 332000)

0 引言

检验特殊类型的亲缘鉴定,常常需要检测更多的短串联重复序列(short tandem repeats,STR)遗传标记。寻找适合中国人群的、具有高度法医学应用价值的 STR基因座是法医物证的研究热点。本文选择了 D7S3048,D10S2325和 GATA 198B05基因座,对辽宁鞍山岫岩满族和广州汉族两个群体进行遗传多态性调查,以了解这些基因座在这两个群体的法医学应用价值。

1 材料和方法

1.1 样本及提取 DNA

随机采取辽宁省鞍山岫岩满族 202名以及广东省广州市汉族 233名无关健康个体血样,每个供血个体追溯 3代以上家族史。岫岩满族样本以 EDTA抗凝血保存,广州汉族样本以棉签血痕保存。Chelex-100提取法[1]提取样本 DNA,利用 Invitrogen公司 Qubit 快速荧光定量系统定量。

1.2 STR基因座引物合成

GATA198B05基因座引物序列根据 Genbank合成,D7S3048和 D10S2325基因座引物是利用 Primer 3软件设计而成。引物由上海生工生物公司合成,D10S2325引物中前导链 5′端标记 6-FAM荧光染料;D7S3048前导链 5′端标记 HEX荧光染料;GATA198B05前导链 5′端标记 TAMRA荧光染料。

1.3 PCR扩增

PCR反应体系为 10μL,包含:5×缓冲液 2.0 μL(缓 冲 液,含 200 μmol/L dNTP、1.5 mmol/L MgCl2),5μmol/L引物 0.2μL～0.6μL,Taq DNA聚合酶 1U,DNA模板 1μL(0.5～-1.0 ng)以及去离子水。PCR反应在 ABI 9700扩增仪上进行,PCR热循环参数均设为:95℃11m in,94℃1min、55℃1 m in、70℃1min 30个循环,60℃延伸 60min,25℃保持。

1.4 扩增片段的电泳分离与检测

采用 ABI 3130型基因分析仪进行毛细管电泳分离,应用 ABIGenemapperID 3.2软件分析结果,等位基因暂时以片段大小标记。按照基因计数法计算等位基因频率。

1.5 测序及等位基因命名

从等位基因片段大小来看,GATA198B05和D7S3048基因座是四核苷酸重复序列,D10S2325基因座是五核苷酸重复序列。……