徐 磊,吴移谋,刘良专,周 洲,陈超群,唐国芳,赵飞骏

肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)为1989年正式命名的一种严格真核细胞内寄生的原核细胞型微生物,常引起急慢性呼吸道疾病,同时还与动脉粥样硬化、心肌梗死、冠心病及脑血管疾病等密切相关[1]。目前用于Cpn感染诊断的方法主要有血清学诊断、分子生物学诊断和细胞培养法等。血清学诊断因其简便、快速的优点而成为Cpn感染的常规检测方法[2],但该方法多为回顾性,且常因在重复感染者中IgM的缺乏而影响诊断价值;分子生物学方法能快速诊断Cpn感染,但也存在假阳性或假阴性的问题;传统细胞培养法也有耗时长,技术复杂等缺陷,但该法为病原学检测保留了有机体的生物特征,出现假阳性的机率很小,因此细胞培养法可作为Cpn感染的“金标准”[3]。本研究采用优化后的细胞培养法从临床标本中分离培养Cpn,并对分离出的菌株进行了初步毒力试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 2009年1月-5月在南华大学附属医院就诊的260例患者的咽拭子和32例肺泡灌洗液,其中男186例,女106例,年龄4～78岁;所有患者均有急性呼吸道感染症状,采样前2w内未服用过大环内酯类药物。

1.1.2 Hep-2细胞(人喉癌细胞) 由南华大学病原生物学研究所细胞培养室保存。

1.1.3 主要试剂和仪器 DMEM培养基购自Hyclone公司;胎牛血清购自Gibco公司;TagDNA聚合酶购自Promega公司;细菌全基因组DNA提取试剂盒购自北京天根公司;抗生素均购自Sigma公司;Cpn鼠单克隆抗体购自Abcam公司;FITC标记羊抗小鼠IgG抗体购自北京博奥森公司。……