靖 会 李教社 杨银京 西安医学院药学院(西安 710021)

连翘为木犀科连翘属植物连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果实,主产于我国山西、河南、陕西、山东等地。连翘有清热解毒、散结消肿之功效,主治温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、小便淋闭等症,现代临床上多用于治疗呼吸道感染、急性肾炎、肝炎、脑膜炎等疾病。现代药理研究表明,连翘中含有的连翘酯苷 A(Forsythoside A)具有极强的抗菌及抗病毒活性,为其主要有效成分之一。连翘根据其果实成熟程度,商品有青翘和老翘之分。本研究对不同部位、不同产地及不同采集时间的连翘中连翘酯苷 A的含量进行了对比,为探索最佳药材采收期及扩大药用资源提供理论依据。

1 仪器与试药 1.1 仪器 美国 TSP2000高效液相色谱仪,UV100紫外检测器,ANAST AR色谱工作站(奥康科技有限公司),HS6150D超声仪(天津恒奥科技发展有限责任公司),AE240型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试药 连翘酯苷 A对照品(自制,光谱学数据与文献报道一致,归一化法测定其质量分数＞98%)。连翘(老翘和青翘)、连翘心、连翘叶、连翘花,分批采自陕西省黄龙县及陕南汉中地区,经西安交通大学医学院郭增军副教授鉴定为木犀科连翘属植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实、种子、叶及花。乙腈为色谱纯,水为三蒸水,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果[1]

2.1 色谱条件 色谱柱:TIANHE C18(150mm× 4.6mm,5 μ m);流动相:乙腈∶水∶醋酸 (15∶ 85∶0.2);流速:1.0m L◦ min-1;检测波长:332nm;柱温:室温。对照品及样品色谱图见图 1。

图1 对照品及样品的色谱图 A对照品 B老翘 C青翘 D连翘心 E连翘叶 F连翘花 1连翘酯苷 A

2.2 供试品溶液的制备 取样品粉末(80目)约0.1g,精密称定,置 25mL量瓶中,加入 50%甲醇溶液20m L,超声 1h,取出,放至室温,加 50%甲醇溶液至刻度,摇匀,用 0.45 μ m微孔滤膜过滤,即得。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取连翘酯苷 A对照品 8.10mg,置 10m L量瓶中,用 50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,配成 0.810g◦ L-1的对照品溶液。

2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液5mL置 10mL量瓶中,用 50%甲醇溶液定容至刻度,得浓度为 0.405g◦ L-1的对照品溶液,由此稀释得系列标准溶液,分别进样 20 μL,测定峰面积。以进样浓度(g◦ L-1)为横坐标,峰面积为纵坐标,测得回归方程为:Y=1 038 545.97-7 923.47,r=0.999 9,线性范围0.010～ 0.810g◦ L-1。

2.5 精密度试验 取同一份对照品溶液,重复进样 5次,测得峰面积的 RSD为 0.50%。

2.6 重复性试验 取同一批药材样品 5份,分别制备供试品溶液进行测定,其结果的 RSD为 0.67%。

2.7 稳定性试验 对同一供试品溶液,分别于0,1,2,4,6,8,10,12,24h进样,峰面积的 RSD为 1.80%,表明供试品溶液在 24h内基本稳定。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品 5份,各约 0.05g,分别精密加入对照品溶液(0.385g◦ L-11)1mL,按 2.1项制备供试品溶液进行测定,结果连翘酯苷 A的回收率为 100.5%,RSD为 1.61%(n=5)。

2.9 样品的测定 取连翘各部位的粉末,按 2.2项下操作,测定,计算连翘酯苷 A的含量。结果见表 1。

3 讨 论 3.1通过比较发现,不同部位、不同产地及不同采集时间连翘中连翘酯苷 A的含量均不同,在 0.99%～ 6.97%之间。不同部位相比较,连翘叶中连翘酯苷 A的含量最高,青翘、连翘花、连翘心中连翘酯苷 A的含量均较高,老翘中连翘酯苷 A的含量较低;青翘中连翘酯苷 A的含量明显高于老翘。不同产地相比较,陕北黄龙地区产老翘、连翘花中连翘酯苷 A的含量低于陕南汉中地区,而连翘心中连翘酯苷 A的含量高于陕南。不同采集时间相比较,青翘中连翘酯苷A的含量逐渐下降,以六月为最高;连翘叶中连翘酯苷A的含量逐渐下降,以五月为最高。

3.2 连翘秋季果实初熟尚带绿色时采收,除去杂质,蒸熟,晒干 ,习称“青翘”;果实熟透时采收,晒干,除去杂质,习称“老翘”。连翘种子称为“连翘心”。青翘与老翘在药典中均作为药用。对连翘酯苷 A含量的分析结果可指导连翘药材的采收,提示在使用连翘时无需去心,并提示青翘的抗菌效价高于老翘。

表1 不同部位、不同产地及不同采集时间连翘中连翘酯苷 A的含量测定结果

3.3 我国长期以连翘果实入药,含量测定结果表明其叶子、花、种子也有很高的药用价值,可进一步开发利用。此结果对扩大药用资源有一定的指导意义。

3.4 含量测定结果发现五月份采集的连翘叶中连翘酯苷 A含量最高。同时有文献报道[5],连翘苷在连翘叶中的含量以五月份最高。说明连翘叶中的有效成分在五月份达最高,民间采集幼嫩的连翘叶作为保健茶原料是有一定科学依据的。

[1] 靖 会,李教社,曹 蔚,等.高效液相色谱法测定连翘中连翘酯苷的含量[J].西北药学杂志,2003,18(4):156-157.

[2] 朱凤云,姬晓敏,陈志红,等.连翘叶采收期探讨 [J].中药材,2002,25(8):547.