苏伟明,马润娣,于立坚 (广东海洋大学海洋药物研究与开发重点实验室,广东湛江524025)

于廷曦 Cell Biology Group,Department of Surgery,Department of Pathology,University of Maryland School of Medicine and Baltimore Veterans Affairs Medical Center,Baltimore,MD 21201,USA

离子交换层析主要利用蛋白质等电点 (pI)的差异使其分离,即在一定的缓冲体系中,不同蛋白质与离子交换凝胶有不同的结合能力,而不同浓度的NaCl可以把不同结合力的蛋白质从层析柱上先后洗脱下来。由于离子交换层析具有处理量大、分辨率较高和成本低廉的特点[1],因此,该技术在众多蛋白质分离中得到广泛应用。

福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)功能域从赤魟组织中分离得到,分子量大约为43000Da,具有强抗血管生成活性和强抗肿瘤生长和转移作用[2～5]。将用DNA重建技术构建的、含FAT-03功能域基因的质粒整合入 BL121(DE3)大肠杆菌中,其表达的蛋白质即重组福安泰-03功能域 (recombinant functional domain of Fuantai-03,rFAT-03)。将重组福安泰-03功能域分离纯化是获得具有实用价值产品的关键步骤。下面,笔者在20℃、上样量一致、层析介质相同的条件下对离子交换层析纯化重组福安泰-03功能域功能域的工艺条件进行了研究。

1 试验部分

1.1 材料

HiTrap Desalting5×5ml(17-1408-01)脱盐预装柱、HiT rap DEAE Sepharose FF琼脂糖凝胶、XK 26/20柱均为美国GE公司产品;L-还原型谷胱甘肽 (AMRESCO公司);Tris(Genriew公司);丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、T EMED、SDS购自北京鼎国生物广州分公司,其余试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器

AKTA explorer 100蛋白质快速纯化开拓系统 (美国GE公司);Avant J-25大容量高速冷冻离心机 (美国贝克曼公司);3K30高速冷冻离心机 (德国SIGMA公司);420A pH计 (美国奥力龙公司);Mini trans垂直电泳槽加转印系统 (美国Bio-Rad公司);FR-1000凝胶成像系统 (上海复日公司);Milli-Q RG(美国Millipore公司);2501紫外分光光度计 (日本岛津公司)。……