王璐璐

锦州市农业经济研究中心，辽宁 锦州 121002

北冬虫夏草亦称蛹虫草。为麦角菌科虫草属真菌，是我国一种名贵药用真菌，同时也是国家二级保护物种。它生在夜蛾科等昆虫的蛹上，从虫的头部或虫体上长出子座，新鲜时橙黄色。北冬虫夏草具有镇静、平喘、抗心率失常、抗疲劳等功效，且能增强免疫能力，因而在国内外倍受欢迎，人工栽培北冬虫夏草是解决野生虫草来源不足的良好途径。本研究从北冬虫夏草生长的环境因子着手，探索北冬虫夏草生长的最适环境条件。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 菌种来源:沈阳农业大学微生物研究室

1.1.2 培养基

1）母种斜面培养基:PDA培养基（马铃薯200g 蔗糖20g琼脂 20g 水 1000ml）

2）2液体原种培养基：20%马铃薯提取液中加入1%葡萄糖，1%蛋白胨， 0.5%KH2PO4，0.3%MgSO4，VB1微量（10mg/1000 ml）,PH调至5.8，121℃高压灭菌0.5h。

3）人工栽培固体培养基：小麦28g 水42ml

1.1.3 试验仪器和设备

高压湿热灭菌锅，恒温培养箱， 超净工作台，无菌室。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种筛选

1）原种的制备 选取高产、优质、早熟的北冬虫夏草子实体，用0.1%升汞溶液，或75%的酒精进行表面消毒后，用无菌水清洗表面药液，置于盛有PDA培养基容器上方悬空，在21℃～23℃下静置培养，待培养基表面出现星芒状虫草菌落时，在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养。待蛹虫草菌丝布满斜面后再提纯。获得的孢子母种须经出草比较试验后，选取优质虫草子实体再进行一次组织分离，经筛选后方可用于转扩栽培种。

2）斜面菌种的制备：将保存的菌种在超净工作台上转接到以制好的斜面培养基上，每管可转接20管，放在恒温培养箱中21℃培养几天，待菌丝布满整个斜面时从恒温培养箱中取出。

3）液体菌种的制备:将以制备好的液体培养基分装入250ml的滴流瓶中，每瓶100ml。按常规方法进行高温湿热灭菌121℃灭菌30min。在超净工作台上将斜面菌种转接到液体培养基中，每支转接30～50瓶，接种后放入21℃恒温培养箱12h，斜面菌种沉底的挑出。然后放入转速为80～120r/min 摇床培养5～7d，待形成均匀小球后即可用于栽培种。注意：如果培养液变混，有两种可能性，一是细菌污染应予以淘汰；二是由于菌丝生长过分粘稠所致，进行镜检后才能使用。

4）固体培养基的接种与培养：将固体培养基装入750ml的栽培瓶中，用聚乙烯朔料薄膜封口，进行高压湿热灭菌（方法同上），冷却至室温后，用接种抢在无菌室内将液体菌种打入栽培瓶中，每瓶菌种接200瓶。将接完种的栽培瓶放入21℃无菌室进行培养。

1.3 蛹虫草栽培环境条件的研究

1）试验 内容分别以菌丝体和出菇两个阶段进行设置，温度 ：18℃、21℃、25℃、27℃ ；接种量 ：0.5ml、1ml、5 ml。

菌丝体培养时间：设起泡和菌丝倒伏两个处理。

2）出草时设置温度 湿度和光照3个项目来培养观察。

2 结果分析

蛹虫草栽培环境条件的研究结果。

2.1 菌丝体培养阶段各个处理结果如下：

表1 蛹虫草不同温度培养菌丝体生长情况

由表可知，菌丝体在 21℃生长最快；18℃、25℃生长状况较好， 27℃生长滞缓，18℃菌丝长的较粗壮。

1）不同接种量对菌丝体生长的影响：接种量大菌丝长满和变黄速度较快。

2）菌丝体培养时间对菌丝体生长的影响：菌丝气泡取出：菌丝转色快、现蕾早；菌丝倒伏取出：转色慢 现蕾晚；因此，菌丝长满后应从恒温箱取出见光培养，以刺激转色出草。

2.2 出菇阶段环境因素

2.2.1 温度影响

从出草期不同阶段的3个试验批次来看：室温15℃以下，菌丝生长滞缓，菌丝由营养生长向生殖生长的转化受到抑制。10℃以下，大多数瓶内出现菌丝自溶现象，出草情况很差。平均室温18℃，菌丝转化快、现蕾早、子实体生长旺盛，产量高。平均室温25℃，菌丝转化快，现蕾早，但是如果温度高达27℃，子实体生长滞缓，多以分叉，瓶内有大量冷凝水，有的瓶内出现杂菌。

2.2.2 湿度影响

瓶内湿度大，出现大量的气生菌丝影响出草质量；湿度小其生长速度受到抑制。培养基湿度应该控制在50～55% 塑料纸上有水滴而瓶璧上水珠不多为宜。菌丝培养时室内湿度控制在65%～70%；子实体生长阶段空气湿度控制在75%～85%。

2.2.3 光照的影响

菌丝生长阶段不需要光照，光照会使培养基颜色加深，易形成气生菌丝，并使菌丝提早形成菌被。在转色阶段需要光照强度100～200勒克斯，光线过弱，原基分化困难，出草少，子实体呈淡黄色，产质量低。并且北冬虫夏草虫草子实体有很强的向光性，在前排放置的虫草比后排放置的虫草子座生长速度快。在子实体生长期间，经常转动栽培瓶，可保持良好的草行。

3 结论

1）采用沈阳农业大学微生物研究室菌种，小麦固体培养基配方进行栽培，灭菌20min，接种后，进行栽培管理，保持适宜的环境因素方可培育出高产优质的蛹虫草。

2）北冬虫夏草变温结实型真菌。菌丝最适生长温度为18～25℃，原基形成以18℃为宜，原基分化时需要较大温差刺激（8～10℃）。子实体生长最适温度20～25℃。

3）北冬虫夏草培养基含水量要求为55%～60%，含水量菌丝生长缓慢，过高培养基易酸败。子实体发生和生长阶段要求空气相对湿度达65%～85%。湿度过大，会引起子实体腐烂。

4）北冬虫夏草菌丝生长时不需要光，但转色期间原基分化需光照强度100～200勒克斯的散射光，北冬虫夏草虫草子实体有很强的向光性。

5）通风方面：北冬虫夏草子座发生期需要氧气，通气量会形成二氧化碳积累过多，子座不能正常分化或出现密度大、子座纤细的畸形虫草。