谭少华,林耀波,李丽娟

(番禺区中心医院神经内科,广东 广州 511400)

谷氨酸(Glutamate,Glu)是神经系统内的兴奋性氨基酸,作为神经递质之一参与体内多种病理生理过程,在脑部缺血缺氧过程中,过多的谷氨酸产生的兴奋毒性作用可能引起神经元的凋死亡。一氧化氮(Nitric oxide,NO)作为一种血管舒张因子,不仅对心血管功能有调节作用,还起着神经递质的作用[1],有报道发现 NO参与了谷氨酸介导兴奋毒性作用[2]。依达拉奉作为一种自由基清除剂,对缺血缺氧状态下的神经元的保护作用已得到众多的研究证实。本研究旨在探讨依达拉奉对谷氨酸毒性作用下诱导的神经元释放 NO的影响,进一步阐明依达拉奉保护神经元的作用机制。

1 材料与方法

1.1 原代神经元的培养 根据文献方法并作出改良[3],将出生 24 h内的 SD大鼠分离脑组织后,以一次性注射器(5 ml)针头捣烂脑组织,注射器反复抽吸 3次,加入 0.125%胰酶(含 0.2‰EDTA)3 ml,置入 37℃水浴箱持续震荡消化 3-5 min。细胞计数后调整细胞数目为 106/ml,接种于已用多聚赖氨酸铺板的 6孔培养板上,24 h后换液,并加入阿糖胞苷 -C(终浓度为 10μM)抑制其他细胞生长。24 h后再次换液,终止阿糖胞苷 -C的作用。以后每 2-3 d换上述培养液 1次,培养 7 d后用于实验。

1.2 神经元纯度鉴定 原代神经元培养 7 d后,神经元特异烯醇化酶 (NSE)染色确定分离培养神经元纯度:PBS冲洗后加入一抗(兔抗大鼠 NSE:1∶200),4℃冰箱过夜,次日室温下放置 30 min,加入二抗(山羊抗兔 IgG,1∶200),观察 NSE阳性细胞率。

1.3 实验分组 原代神经元培养 7 d后,实验分为三组,空白对照组、Glu(50μM)组以及 Glu(50 μM)+Eda(100μM)组,分别在加入上述药物处理前、6 h及 24 h后提取三组培养基作 NO浓度检测。……