代雪枫 严家春 李峻峰 徐长江 袁苏娜

调宁蛋白（Calponin，CaP）是平滑肌所特有的重要调控蛋白。研究显示，它具有调节平滑肌收缩、抑制细胞增殖及参与细胞骨架的维持等作用[1～3]。慢性乙型肝炎（CHB）的一个重要病理变化就是肝脏微循环障碍。基于肝脏组织血液供应的特殊性，有必要对CaP在CHB患者肝脏血管改建中的作用进行研究。我们对200例CHB患者肝活检组织进行了CaP检测，以探讨它们之间的关系。

材料与方法

一、材料与分组 收集2004年1月至2007年12月我院200例CHB肝活检组织，男143例，女57例，年龄15～57岁（平均年龄29.5±8.5岁）。按照国内诊断标准[4]，包括 CHB 轻度（G1～G2）、CHB 中度（G3）和CHB重度（G4）及肝硬化（LC）各50例。经免疫组化检测，患者肝组织HBsAg皆阳性。另选10例肝组织HBsAg阴性，肝组织学大致正常者作对照。

二、肝组织学检查 采用16号肝活检针抽取2条肝组织，其长度≥1.5cm。其中一份用10%福尔马林固定，常规制片，备HE及免疫组化染色；另一份按照电镜技术制样，备电镜观察。根据肝窦Ⅳ型胶原分布范围，将肝窦毛细血管化定为轻（占肝小叶≥1%）、中（占肝小叶≥33%）、重型（占肝小叶或假小叶≥60%）。

三、肝组织CaP免疫组化检测 采用S-P法检测肝组织CaP的表达。抗CaP单克隆抗体及免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。判断标准：阴性（－）：无明显阳性细胞；阳性（＋）：显棕黄色，肝细胞质膜散在表达，肝窦及毛细血管灶性或断续表达，其表达范围均占所观察视野的10%～30%；强阳性（＋＋）：显深棕黄色或黄褐色，肝细胞、肝窦壁内皮细胞、胆管细胞、成肌纤维细胞、血管纤维间隔及炎症区的梭形细胞等均有表达，表达范围占所观察视野的30%以上。

四、统计学处理 数据采用x2检验，P＜0.05认为有显著性差异。

结 果

一、调宁蛋白在CHB肝组织的定位 在对照组，CaP仅在汇管区的血管及胆管壁有弱表达，其余肝组织无表达；而在CHB组，CaP在肝实质及肝间质细胞均有表达。在CHB肝组织，CaP表达主要分布于肝细胞（图1）、小胆管或胆管样细胞（图2）、肝窦壁内皮细胞（图3）、肌纤维带（图4）、毛细血管增生区域（图5）、贮脂细胞及成肌纤维细胞（图6）。免疫组化染色提示，CaP表达变化有以下特点：A：有肝窦扩张或阻塞的内皮细胞及贮脂细胞示阳性表达，纤维带内的小血管及其周边的肝细胞、炎症区域周围的肝细胞、假小叶的肝细胞则示强阳性表达；B：纤维瘢痕组织中的胆管或胆管样细胞及成肌纤维细胞示阳性表达；C：肝窦毛细血管化及肝窦扩张的内皮细胞、增生的血管内皮细胞及其肌纤维带则示强阳性表达（图4）；D：异型增生的肝细胞示阳性表达（图7）。

图1 肝细胞CaP强阳性（SP×400）

图2 胆管细胞CaP阳性（SP×400）

图3 肝窦及血管内细胞CaP表达（SP×400）

图4 肌纤维束CaP表达（SP×400）

图5 毛细血管增生区CaP表达（SP×400）

图6 贮脂及成肌纤维细胞CaP表达（SP×400）

图7 异型增生肝细胞CaP表达（SP×400）

二、调宁蛋白表达与CHB肝内病变的关系 本组资料提示，CaP表达与CHB肝内病变的轻重程度有关：在CHB轻度组，少数病例（24%）肝组织CaP表达，与对照组相似，且强阳性表达少见（6%）；而在CHB重度组，肝组织中CaP表达阳性占33%，强阳性占67%（P＜0.01）；在LC组，除假小叶内的肝细胞CaP示弥漫性强阳性表达外，纤维组织内的小胆管上皮细胞、扩张的毛细血管内皮细胞、成肌纤维细胞及平滑肌纤维带（图4）皆表达上调，与上述组间有极显著性差异（P＜0.01）。肝组织CaP表达及组织定位与CHB肝内病变的关系见表1。

表1 CaP在肝组织的表达变化及定位

三、调宁蛋白表达与肝窦毛细血管化的关系 本组伴肝窦毛细血管化者161例（81%）。资料显示，在CHB重度肝组织同时发生肝窦闭塞及扩张改变，肝窦毛细血管化病变也较重，CaP表达范围广，显色深；而在CHB轻度组，则肝细胞示浊肿，肝窦狭窄多见，肝窦扩张罕见，肝窦毛细血管化也较轻，CaP表达范围小，显色弱，提示CaP表达变化与肝窦毛细血管化的轻重程度同步（表2）。

表2 调宁蛋白表达与CHB肝窦毛细血管化的关系

讨 论

本研究发现，①CaP在对照组肝组织定位于血管及胆管，其余组织无表达；②在CHB肝组织，则肝细胞、贮脂细胞、成肌纤维细胞、肝窦内皮及毛细血管化的内皮细胞、小胆管上皮细胞、平滑肌纤维带等组织均有CaP表达；③CaP表达随CHB肝组织的变性坏死、炎细胞浸润程度的加重而表达上调；④伴随肝窦扩张、血管增生、肝窦毛细血管化及纤维化，CaP强阳性表达率增加，提示CaP表达调节受CHB肝脏微循环障碍状态的影响。

CaP主要生理功能是调节平滑肌的收缩和舒张[5，6]。正常生理情况下，平滑肌受到外界刺激时，通过Ca2和磷脂激活蛋白激酶C，导致CaP磷酸化，不再抑制肌球蛋白ATP酶活性，平滑肌收缩；反之则平滑肌舒张[7，8]。本研究发现，CaP表达变化与CHB肝微循环障碍有关。资料显示，在肝内病变较轻时，汇管区血管炎症虽较明显，但血管破坏及阻塞的范围较局限，肝界板完整或轻微破坏，肝细胞水肿及肝窦狭窄是局限的，中央静脉完整，表明其有局限性血供输入不良。而在肝内病变较重时，不仅肝实质伴随显著的血管增生及肝窦毛细血管化，而且这些增生的血管可形成汇管与汇管、汇管与中央静脉甚至跨小叶连通，即构成所谓的桥形坏死或纤维化，导致肝小叶严重紊乱，在LC组肝细胞被血管间隔分隔为大小不同的团块（假小叶），因其无中央静脉，加之肝细胞水肿引起肝窦闭塞，故导致肝小叶血液输入和输出障碍。在这样的病理状况下，可能反馈地引起CaP合成分泌增加，也可能引起Ca2＋的变化，以改变ATP酶活性方式使CaP磷酸化或脱磷酸化，加速肝组织血液的输入和输出，以调整不利的病理环境。

本资料证实，CaP在CHB肝组织合成分泌是增加的。CaP分泌上调应增强血管的收缩[9，10]，这与CHB轻度组肝窦闭锁，毛细血管化的血管多闭合较一致。然而，在本组肝病重度组，CaP在肝组织表达虽然增加，但多数肝窦及血管则示扩张改变。我们认为，肝窦及血管扩张表明肝内压力增加，系门脉高压所致，而CaP除了可启动肌球蛋白轻链磷酸化，促进肌动蛋白与肌球蛋白结合及ATP酶活性，增加肌丝滑行及平滑肌收缩外[11，12]，尚有抑制ATP酶活性，减少肌动蛋白运动的功能，从而使平滑肌舒张，在门脉高压下而引起肝窦毛细血管扩张。

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