Sharon A. Doyle

High Throughput Protein Expression and Purification

2009

Hardcover

ISBN 9781588298799

Sharon A. Doyle著

随着全基因组测序技术日新月异的发展,科研人员现在可以很快捷的获得一种生物编码的所有蛋白的信息,这使得我们可以在细胞水平甚至生物体水平上研究蛋白结构、功能和蛋白质间相互作用。众多学科从中获益,从结构生物学、功能基因组学到药物发现等多个领域都将因此而获得长足的发展。

但伴随巨大机遇而来的还有新的挑战。同样是构成生命体的重要大分子,蛋白质分子和DNA分子不同,它们具有更加复杂的多样性,无论是结构还是功能都没有明显的可供遵循的规律。由于蛋白质分子在体积、电荷、形状以及外部的化学环境等方面的差别,重组蛋白表达时能正确折叠和稳定的条件千差万别,同时也很难采用统一的方法同时从多种蛋白表达体系中分离出有活性的目的蛋白,这给平行进行多种蛋白的表达和纯化带来很大的困难。

但是对于同时制备多种蛋白的需求来说,高通量的平行实验是必须的。在过去几年里,生物化学家、仪器工程师和生物信息学家研究出大量的策略来进行蛋白的高通量生产,这其中不仅有能够平行操作多种蛋白样品的仪器的开发,还包括对蛋白分子的共同特征的探索,使得不同种类的蛋白可以同时实现批量的克隆、稳定表达和纯化。

本书介绍了最新的高通量基因克隆、蛋白表达和制备技术。方法涉及面广,涵盖了利用大肠杆菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞和无细胞体系来表达各种蛋白的具体方法,以及下游的高通量分离纯化策略。对表达纯化难度很大的糖蛋白和膜蛋白也有很好的思路。全书一共分为20个章节,每个章节各自独立的介绍一种方法,这20种方法合在一起形成了密不可分的体系,全面系统的描述了从基因克隆、蛋白表达到下游分离纯化的高通量操作流程。

每章都对所述方法给出简要介绍,列出必要的方法和试剂、详细实施步骤,并且对可能出现的问题给出了提示和解决方法,本书描述的方法都是目前顶级科学家正在使用的可行的策略,对研究蛋白质的生物化学家和相关领域的实验人员会大有帮助。

著者Sharon A. Doyle曾经供职于美国能源部基因组研究所,近年来在美国科学院院刊(The Proceedings of the National Academy of Sciences, PNAS)、核酸研究(Nucleic Acids Research)、生物化学杂志(Journal of Biological Chemistry, JBC)等高水平期刊上发表了一系列关于蛋白质表达纯化和功能研究的方法学文章。

郑迎迎,博士生

(中国科学院微生物研究所)

Zheng Yingying,Doctoral Candidate

(Institute of Microbiology,CAS)