余慧琳　胡月华　李　君

摘要：对药用植物栝楼的离体快繁进行了研究。结果表明，MS培养基+BA 0.2～0.3mg·L^-1+NAA 0.1～0.2ms·L^-1组合最适合诱导栝楼茎段腋芽形成无菌试管苗；MS+BA 0.1 mg·L^-1t+NAA 0.1～02 mg·L^-1组合是继代增殖最适培养基；1/2 MS+NAA 0.2mg·L^-1组合是生根最适培养基。

关键词：栝楼：离体快繁

中图分类号：Q949.782；Q943.1文献标识码：A文章编号：0439-8114(2009)02-0272-02

栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)亦称野葫芦、吊瓜、天瓜、苦瓜、瓜蒌、天花粉，为葫芦科栝楼属攀援草质藤本植物。栝楼为我国传统常用中药材，宋代《本草图经》、明代《本草纲目》均有记载。主要分布于山东、河南、山西、河北、北京、浙江、安徽等15个省市，现代医学研究发现，天花粉蛋白能够抑制肿瘤的生长和多种病毒繁殖，特别是对HIV病毒复制有较强的抑制作用。栝楼子营养丰富，果实中含有三菇皂甙、有机酸及盐类、树醋、糖、色素、脂肪等：叶含山奈甙，其提取液具抗癌作用，对高血压、高血脂、高胆固醇有辅助疗效。栝楼为常用大宗中草药之一，全身都是宝，栝楼子能提高肌体免疫功能，并有瘦身、美容功效。最近十多年来，河南安阳、安徽潜山、浙江长兴等地几乎同时向市场推出栝楼(安徽称“野葫芦”、浙江称“吊瓜子”)L21。但由于受品种资源研究滞后、现有品种产量低下等影响，市场上栝楼货源奇缺。缺乏适合现代化种植方式的高产、优质、高效品种是目前制约栝楼生产发展的主要原因，特别是在安阳、潜山、长兴食子栝楼的主产区(引种的种苗皆为当地野生栝楼)。栝楼雌雄异株，开花前无明显的形态差异，难以分辩，利用植物组织培养技术，建立栝楼优良品种离体快繁体系，能在短期内培育出大量的基因遗传稳定、经济性状表现一致的优质种苗。从而迅速实现栝楼优良品种的大面积推广利用，这对推动栝楼的产业发展意义重大。为此，我们以生产中发现的优良单株(雌栝楼)为材料，探寻离体快繁关键技术，旨在为栝楼优质种苗工厂化生产提供依据。

1材料与方法

1．1材料

供试栝楼为豫东花卉有限公司人员从安阳市种植的中药栝楼中按照食味佳、品相好、产量高、抗性强等4个指标筛选出来的1株雌性栝楼优良单株，在田间采取茎段带回实验室。

1．2方法

1．2．1外植体消毒将栝楼茎段洗净，切成2cm左右的小段，放入高锰酸钾500倍液浸泡40min后放人新洁尔灭500倍液浸泡30min，备用。将栝楼小段剪成1.0cm左右带节的切段，于自来水下流水冲洗1h，剪去叶片，吸干水后置于超净工作台上。将栝楼苗切段浸入75％的酒精中5～7s，无菌水冲洗1次，再用升汞1‰溶液消毒8～10min，或用体积比为1:25的次氯酸钠溶液消毒8～10min，无菌水冲洗3～4次，滤纸吸干表面水分，在无菌条件下将茎断面和叶柄再切去1小段(减少灭菌药物毒害)，放在玻璃皿中备用。

1．2．2栝楼无菌苗的诱导将切段接种于添加不同激素组合的NS+3％蔗糖+0.8％琼脂(pH5.8)培养基上，激素有BA、NAA、水解酪蛋白。置于温度(25+1)℃、光照14h、光照强度2500Lx左右的条件下培养。50d后获得栝楼无菌苗。

1．2．3栝楼试管苗的快繁将栝楼无菌苗切成0.5～0.8cm的茎段，接种于添加不同激素组合的MS+3％蔗糖+0.8％琼脂(pH 5.8)培养基上，置于温度(25±1)℃、光照14h、光照强度2500lx左右的条件下进行增殖培养，30d统计结果。

1．2．4栝楼试管苗的生根和移栽将具有3～4节、3.5～4.0cm长的健壮试管苗转入添加不同浓度NAA的1/2 MS+2％蔗糖+0.8％琼脂(pH5.8)培养基上进行生根培养。将根系健壮的试管苗经4～5d炼苗后，移栽到栽培基质中。

2结果与分析

2．1栝楼无菌苗的诱导及快繁

依据有关文献资料报道的方法，以前人优选的5种不同激素配比的培养基进行栝楼无菌苗诱导试验，茎段接种30d后的试验结果见表1。表1显示，在1号和2号培养基上，只有少量外植体侧芽萌发，且随外植体基部愈伤组织的迅速膨大，侧芽生长停滞，最后被愈伤组织淹没，基部愈伤组织直径达2.5～3.5cm。在3号和4号培养基上，侧芽萌发较多，成苗数不多，苗矮小，基部愈伤组织直径达2.0～2.5cm；且加0.2mg·L^-1NAA的培养基中，基部愈伤组织明显要大。在5号培养基上，萌芽、成苗最好，萌芽率和成苗率均为100％以上，平均苗高达3.5cm，但叶片较小，培养30d后，小苗叶色均偏黄，生长状态不良。

2．2生根以及试管苗移栽试验

待瓶苗发育到3～4片叶、有3～5条根且根长为2～3cm时，可出瓶栽植。瓶苗移栽前，要炼苗1周，然后小心将苗从瓶内取出，用清水将培养基及琼脂冲洗干净，切勿伤断根系，再用杀菌剂多菌灵或甲基托布津等稀溶液浸泡5min，可以提高移栽成活率，且对污染苗移栽效果比较明显。将经过适当炼苗后的试管苗移栽在泥炭：蛭石：珍珠岩为2:1:1的混合基质苗床上，结果见表2。试验发现，1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1，是生根的最适培养基。

3小结与讨论

栝楼是一种多年生草本植物，一次种下、多年收获，投资少、见效快，而且地边、塘堰和家庭院落都可种植，是农民脱贫致富、实现小康的重要产业和“短、平、快”项目，同时也是绿化、美化城市环境的经济植物，前人的研究材料主要集中在实生苗上。但由于栝楼性别的特殊性。导致许多研究对象都是雄性而成为研究中的欠缺。但是。块茎苗、试管苗、非试管快繁苗三者的产量形成期是否有明显差异，同一栝楼品种的块茎苗、试管苗、非试管快繁苗在生产中的坐果习性、抗性、生长势等方面的存在差异性如何，还有待于进一步研究。

栝楼的组织培养始于20世纪90年代，前人以带腋芽茎段为外植体，MS为基本培养基添加外源激素实现植株的再生。其后，又有多位学者进行了相关研究，取得了良好的进展。但由于他们所取用的外植体材料均不是来自生产中的优良株系，并且绝大部分都来自种子实生苗，而种子实生苗中95％都为雄株。研究表明，雌、雄栝楼生长发育过程中内源激素水平差异颇大。大多数研究都只完成了无菌苗的诱导和快繁过程，而没有对育苗需要的栝楼试管苗进行多代增殖研究，因此，有必要对栝楼优质种苗组培快繁作更深入的研究。本试验以实现栝楼优质种苗组培快繁了化生产为目的，以生产中发现的雌性栝楼优良单株为材料，从实现栝楼试管苗多代、健壮、稳定增殖人手，筛选出了适宜的无菌苗诱导培养基和增殖培养基。结果表明，MS+BA 0.2～0.3 mg·L^-1％NAA 0.1～0.2mg·L^-1，组合最适合诱导栝楼茎段腋芽形成无菌试管苗；而MS+BA 0.1mg·L^-1+NAA 0.1～0.2mg·L^-1，组合是继代增殖快繁最适培养基：1/2MS+NAA 0.2 mg·L^-1是生根的最适培养基。不过由于试验仅仅是针对1个优良单株而作出的，还需要作更深入地多个优良单株的比较研究。

(责任编辑王珞)