高效液相色谱法测定益髓颗粒中丹参素的含量

2009-04-25，，

长春中医药大学学报 2009年4期

，，

(1.吉林省中医药科学院，吉林长春 130021；2.长春大格医药有限责任公司，吉林长春 130012；3.吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012)

益髓颗粒系由丹参等18味中药组成的复方制剂，具有益精填髓，补肾壮阳等功效。处方中丹参为唇形科植物SaluiamiltiorrizaBge.的干燥根及根茎。主要含丹参酮ⅡA,丹参素，丹酚酸B,原儿茶醛等有效成分。为控制本制剂的内在质量，采用反相高效液相色谱法测定丹参中丹参素的含量。方法易于操作，结果准确，重现性良好。

1 仪器与试药

Agilent 1100 series高效液相色谱仪，丹参素钠对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110855-200508)，供含量测定用,甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果[1-3]

2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(4.6×250 mm,5 μm)；流动相:甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰醋酸(2：95：2：1)；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长：283 nm；理论板数按丹参素峰计算应不低于4 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品适量,加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液(相当于每1 mL含丹参素45 μg)，即得。

2.3 供试品溶液的制备取益髓颗粒内容物，研细，取4.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入盐酸溶液(1→50)50 mL，超声处理(功率250 W,频50 KHz)40 min，取出，加入氯化钠5 g，摇匀，离心(3 000 r，12 min)，精密量取上清液25 mL,置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取4次,(50，50，30，30 mL)合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 阴性对照试验为考察试验的合理性,取不含丹参的阴性对照样品，依法进行测定。结果阴性样品色谱在与丹参素峰相应的保留时间无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。

2.4.2 标准曲线制备精密称取丹参素钠对照品适量加50%甲醇制成每1 mL含136.96 μg的溶液，分别精密吸取1，3，5，7，9，11 μL测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程,Y=751.222X+2.596(r=0.999 99)，结果表明丹参素在0.137～1.507 μg范围内，线性关系良好，符合外标法定量测定的要求。

2.4.3 精密度试验精密吸取供试品溶液10 μL(辉南天泰药业,批号：070201)，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积值，数据为566.188、566.122、562.801、559.593、561.236、552.554。RSD=0.9%，结果表明所用仪器具良好的精密性。

2.4.4 稳定性试验取供试品溶液(辉南天泰药业,批号：070201)，按以上色谱条件测定，结果RSD=1.1%。结果表明24 h内供试品溶液中丹参素的含量基本稳定。

2.4.5 重复性试验取同一供试品(辉南天泰药业，批号：070201)，依正文方法独立测定6次，结果RSD=1.8%。表明本法具良好的重复性。

2.4.6 回收率试验精密称取已知含量的供试品(辉南天泰药业，批号：070201，含量为0.154 mg/g/6份，分别精密加入对照品溶液(精密称取丹参素钠对照品,加入盐酸溶液(1→50)制成每1 mL含0.242 mg的溶液，相当于丹参素(0.217 8 mg)50 mL，按含量测定方法操作，计算回收率，结果见表1。