任武婷

摘   要   以月季未萌发的腋芽为外植体，利用组织培养技术诱导出无菌芽，然后进行增殖，复壮，生根，炼苗，移栽，能够在短时间内生产出大量品质稳定、无感染且保持母株优良特性的月季种苗，满足市场需求，优化了月季组织培养快繁技术。

关键词   月季；腋芽；组织培养

月季是蔷薇科蔷薇属多年生木本植物，观赏期长，花色丰富，花朵硕大，带有浓郁的香味。月季适应性强，对土壤条件要求不严格，用途广泛，在园林绿化、节日用花、城乡道路旁、家庭小院等都有种植。月季常用的繁殖方法主要有扦插繁殖和压条繁殖，月季枝条数量少，而且受季节影响，冬季修剪下来的枝条不能及时使用，要先沙藏保存，等到春季才可扦插，繁育周期长，生产成本增高。

利用组织培养方法繁育月季，全年都能生产，不受季节影响，能保持母株的优良性状，又能在短期内生产出大批量无毒苗。月季的组织培养外植体主要有茎尖、芽尖、茎节、普通腋芽、腋芽分生组织等。现将腋芽分生组织快繁技术总结如下。

1   准备阶段

准备实验所用的工具、器具，制备出适宜的培养基并经高压灭菌备用，配置出实验用的化学消毒剂（当天配制，当天用完），准备一台体视显微镜。

2   外植体的选择及清洗

1）选择。一般在晴天中午11：00或下午  3：00前采取（忌阴雨天采取）。选取生长旺盛、没有病虫害、品质优良、变异小的丰花月季，当年新抽嫩枝顶尖部位（长约4 cm）。剪取外植体时工具和手必须消毒，以防感染。最好在没有开花的月季植株上选取。

2）清洗。采回的外植体进行修整，剪掉叶片、叶柄、茎刺等不需要的部分，在自来水下冲洗10～15分钟，再用洗衣粉或洗洁精仔细刷洗，用流水冲洗干净。

3   消毒

外植体清洗干净后，放在消毒过的超净工作台上，用无菌的脱脂棉擦拭1遍外植体表面。

75％酒精消毒1分钟，用无菌水冲洗1次；有效氯2%的NaClO溶液消毒20分钟，用无菌水冲洗3次。最后加入0.1 mg/L Vc浸泡20分钟。

4   接种及培养条件

刀用酒精灯灼烧灭菌，解剖刀、镊子的先端在95%的酒精中蘸一下，再用酒精燈灼烧灭菌，置于刀架上冷却，待用。用镊子夹住蘸有酒精的脱脂棉点着，对接种盘里外进行灼烧灭菌，灭菌好的接种盘放上滤纸。

把消毒好的外植体放在滤纸上，吸干表面水分，然后放在体视显微镜下，在叶腋处拔出分生组织（未萌发的腋芽）。接种到芽诱导培养基MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+30 g/L糖，琼脂6.5 g/L，pH值5.7。每个试管接种1个分生组织，盖上试管，试管上标明编号、日期、品种，培养基名称，接种人员等，放入培养室进行培养。

培养室温度25 ℃，光照时间16小时/天，光照强度800～1 000 lx，湿度50%。

接种1周后，在体视显微镜下观察，有无污染（真菌、细菌）、死亡或干枯的分生组织，有则移出。每周在体视显微镜下观察1次，4～6周后，只保留生长旺盛且健康的、仍保持绿色的分生组织。大约两个月后，芽陆续长出，观察芽的生长情况，是否有异常症状出现。

5   增殖培养

将健康的芽切割下来，转接到增殖培养基MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+30 g/L糖，琼脂4.7 g/L，pH值5.8。

增殖阶段改为玻璃瓶，每瓶放3个芽，放置培养室培养，温度25 ℃，光照时间12小时/天，光照强度1 500 lx。

接种3天后检查芽感染情况，并及时清理。大约培养20天左右，萌发出2～3片叶子。两个月后，月季芽长到一定高度，形成单个芽或多个芽簇状。剪掉叶片，剪成 1.5 cm长带有芽（1～2个）的茎段，进行继代培养。每个月继代1次，以后每月大约可以5倍的速度繁育，1年内就可以形成大量的植株。

检查增殖过程中稳定性，对增殖进行评估， 4～6周进行1次为准。检查是否芽过度分化、玻璃化、植株矮化、老龄化、植株发黄、褐化、坏死、丧失芽分化能力等问题。如果出现上述问题，则要进行培养基调整。

如果芽过度分化，应降低6-BA浓度，如减半添加；减少硝酸铵的添加量，可按1/4 的量使用；减少蔗糖添加量，可由30 g降到20 g；减少每个植株带芽数量，从带2～3个芽减少为只带1个芽；增加琼脂添加量。

如果老化，丧失芽分化能力，可增加6-BA浓度，增加蔗糖添加量，减少琼脂用量，转接时不要分株，整个植株一块转。

出现以上情况，尝试重建一个稳定的增殖体系。

6   复壮培养

只有当增殖体系稳定，达到一定的数量时，才可进行壮苗培养。选取无病菌、 带3～4片叶、长度约2 cm的芽，转接到壮苗培养基MS+30 g/L糖， 琼脂4.7 g/L，pH值5.8。壮苗和生根阶段每瓶接种16个芽苗，剩余茎段，继续接到继代培养基中增殖培养。

转接后放在光照12小时/天、光照强度     2 000 lx、温度26 ℃、湿度50%的培养室进行培养。

7   生根培养

月季芽苗生长到一定高度时，选择健壮无伤口、带3～4片叶、长度约2 cm的芽（转接时不要伤叶片或茎部）。用消毒过的剪刀剪下来，转入生根培养基1/4MS+0.1 mg/L NAA+30 g/L糖，琼脂4.7 g/L，pH值5.8。大约20天左右长出根来，根长约0.5 cm，3～4条，这时把瓶苗移到温室进行驯化炼苗。

8   驯化及移栽

从培养室移到温室的瓶苗，在移栽前必须进行驯化，需15～20天。先用遮阴网把瓶苗全部盖住，白天温度23～27 ℃，晚上20～23 ℃，湿度70%左右，使瓶苗逐渐适应温室环境。经过一段时间的锻炼，幼苗叶片由嫩绿色变深绿色，萌发新叶，茎变粗壮，幼苗整体长高，并生出新根，表明幼苗已经适应外界环境。选择阴天或晴天早上移栽。

出瓶前1天，打开瓶塞，盖上报纸，使瓶内湿度与温室湿度接近，用高锰酸钾对花盆、苗盘灭菌。准备好所需的基质，堆肥与珍珠岩按比例混合（60 ∶ 40），并用多菌灵消毒备用。

用镊子从瓶里将幼苗取出，注意不要弄伤叶片和根部。剪掉黄叶，扔掉烂根的、死亡的、一条根的苗，选择生长健壮，根系发达、条数多的幼苗，用纯净水洗掉杂质和培养基，放入10%多菌灵溶液中消毒60秒。移栽至120 mm花盆中，基质要压实一些，根系要充分展开，避免根部损伤，深度适中，以免造成幼苗烂根。

栽好后，按品种摆放在苗床上，标注品种、日期。幼苗移栽后不能直接浇水，先用喷雾器喷雾，打湿基质表面，注意喷雾太多容易造成幼苗腐烂，喷雾不及时，幼苗叶片发黄、萎蔫、干枯，甚至死亡。天晴温度高时，要不定时查看幼苗生长情况，根据实际情况调整喷雾次数，光照强要适当遮阴。定期喷施杀菌剂，防止病害发生。