吴海明,陈 曦,杨云燕,林建成

厦门市儿童医院医学检验科,福建厦门 361006

呼吸道合胞病毒(RSV)是全球性感染的、副黏病毒科的一种呼吸道单链RNA病毒,有RSV-A和RSV-B两种不同的亚型[1-2]。RSV导致全球320万例患儿住院和5.96万例患儿死亡[3]。慢性早产肺病(CLDP)、先天性心脏病(CHD)及早产儿易出现RSV感染致毛细支气管炎,且RSV可导致儿童出现长期后遗症,如喘息和哮喘[4]。RSV是婴儿期毛细支气管炎最重要的病原体,毛细支气管炎最常被描述为病毒诱导的小细支气管及其周围组织的炎症性疾病,RSV感染致毛细支气管炎的特征是婴儿呼气困难、咳嗽、呼吸急促、过度充气、胸部回缩、广泛湿啰音和喘息[5]。目前还没有安全有效的产品应用于RSV的临床治疗,对感染RSV的患儿快速识别并采取有效的预防措施可降低全球RSV感染患儿的发病率和病死率。因此,寻找RSV感染致毛细支气管炎相关生物标志物对临床中RSV感染的防治具有重要意义。膜联蛋白是一种钙调节和磷脂依赖性膜结合蛋白,膜联蛋白A1(ANXA1)是膜联蛋白家族的成员,其参与许多重要的生物过程,如炎症、吞噬、增殖、分化和凋亡[6]。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是来自脂质运载蛋白家族的相对分子质量为25×103的糖基化蛋白,是反映慢性和急性病理状况,特别是炎症、代谢、神经系统和癌症疾病中疾病状态的标志物[7]。因此猜测,ANXA1、NGAL可能参与RSV感染致毛细支气管炎的过程。本文旨在探究RSV感染致毛细支气管炎患儿血清中ANXA1、NGAL的水平,为RSV感染致毛细支气管炎的临床治疗提供新的研究方向。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年6月至2020年6月本院儿科接收的RSV感染致毛细支气管炎患儿150例作为RSV组,根据入院时lowell评分[8],进一步将其分为轻度组(≤9分,87例)和重度组(≥10分,63例)。纳入标准:(1)临床确诊为毛细支气管炎[9];(2)对患儿呼吸道分泌物检测确诊为RSV感染;(3)患儿病发至入院时间在3 d内;(4)患儿年龄≤2周岁。排除标准:(1)合并心、肝、肾等功能障碍;(2)合并其他病原体感染;(3)入院前1个月内经相关药物治疗;(4)合并肺结核、免疫缺病。另选择同期体检健康儿童100例为对照组。RSV组中,男87例,女63例;平均年龄(183.47±56.06)d;有过敏史36例;有父母吸烟史74例。对照组中,男60例,女40例;平均年龄(184.21±55.92)d;有过敏史18例;有父母吸烟史42例。RSV组与对照组之间基本资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究通过本院伦理委员会批准,并得到所有参与者及监护人的知情许可。

1.2方法

1.2.1临床资料收集 采集研究者的年龄、性别、过敏史、父母吸烟史、呼吸频率、氧饱和度、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEUC)及比例、淋巴细胞计数(LMC)及比例、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)等临床资料。

1.2.2采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清ANXA1、NGAL的水平 在研究者入组时清晨采集其肘静脉血5 mL,使用特定的ELISA试剂盒(莱尔生物技术有限公司)检测血清中ANXA1、NGAL水平。配制反应体系后使用酶标仪(美国BioTek公司)测量450 nm处的吸光度。

1.2.3随访分组 对RSV感染致毛细支气管炎患儿进行2年的随访,根据是否继发哮喘分为哮喘组(44例)和非哮喘组(106例)[10]。

2 结 果

2.1对照组、RSV组基本资料及血清ANXA1、NGAL水平比较 RSV组血清ANXA1、NGAL水平分别为(1.51±0.46)μg/mL、(37.87±11.52)ng/mL;对照组血清ANXA1、NGAL水平分别为(0.96±0.28)μg/mL、(25.58±8.41)ng/mL;RSV组血清ANXA1、NGAL水平高于对照组(P<0.05)。

2.2轻度组、重度组血清ANXA1、NGAL水平比较 与轻度组比较,重度组血清ANXA1、NGAL水平升高(P<0.05)。见表1。

表1 轻度组、重度组血清ANXA1、NGAL水平比较

2.3哮喘组和非哮喘组患儿临床特征 与非哮喘组比较,哮喘组的IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP、ANXA1、NGAL水平上升(P<0.05)。两组间的年龄、性别、过敏史、父母吸烟史、呼吸频率、氧饱和度、WBC、NEUC、NEUC比例、LMC、LMC比例比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.4影响RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的多因素Logistic回归分析 以毛细支气管炎患儿是否继发哮喘(否=0,是=1)为因变量,以表4中P<0.05的因素IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP、ANXA1、NGAL水平(具体值)为自变量,进行多因素Logistic回归分析。结果显示,IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP、ANXA1、NGAL水平升高均是毛细支气管炎患儿继发哮喘的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 影响RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的多因素Logistic回归分析

表4 血清中ANXA1、NGAL水平预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的价值

2.5血清ANXA1、NGAL水平对RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的预测价值 以RSV感染致毛细支气管炎患儿血清ANXA1、NGAL水平为检验变量,以RSV感染致毛细支气管炎患儿是否继发哮喘为状态变量(否=0,是=1)绘制ROC曲线,结果显示,RSV患儿血清中ANXA1、NGAL水平及二者联合预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的曲线下面积(AUC)分别为0.780、0.752、0.861,其中联合预测的AUC高于二者单独预测(Z=6.719、5.271,P<0.05)。见表4、图1。

图1 血清中ANXA1、NGAL水平预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的ROC曲线

3 讨 论

RSV引起的急性细支气管炎是一种常见的炎症性传染病,我国0～5岁婴幼儿中,约有24%肺炎及40%～50%毛细支气管炎是由RSV感染所致[11]。典型的临床表现包括咳嗽、喘息、呼吸急促、呼吸困难等,严重时可能导致呼吸衰竭,甚至危及生命,且RSV感染可能损害气道,并导致儿童频繁和持续地喘息,严重时会导致哮喘,其中有30%～40%的严重毛细支气管炎患儿会发生哮喘[12-13]。临床上对RSV感染致毛细支气管炎的治疗主要是支持性治疗,但治疗的相关药物因具有毒性,而在临床应用中受限[14]。因此,寻求与RSV感染致毛细支气管炎关系密切的生物标志物有助于为RSV感染致毛细支气管炎的治疗提供新的研究方向,这在提升患儿的安全和健康方面有重大意义。

ANXA1属于一组Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,参与针对病原体的免疫激活,在炎症反应、增殖、分化和细胞凋亡等功能中发挥作用[15]。有研究发现,口蹄疫病毒感染增加了ANXA1的表达,进而促进了RNA病毒诱导的Ⅰ型干扰素产生[16]。LEE等[17]发现,与对照组小鼠相比,OVA-OVA组小鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液中的ANXA1蛋白水平升高。本研究发现,RSV感染致毛细支气管炎患儿血清ANXA1水平显著升高,且重度组中ANXA1水平高于轻度组,表明ANXA1加速RSV感染致毛细支气管炎的发展,与上述研究结果类似。IBRAHIM等[18]研究结果显示,哮喘患儿血清中ANXA1水平升高,其可能是哮喘潜在诊断生物标志物和未来的治疗靶点。本研究进一步发现,高水平ANXA1是RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的独立危险因素,且其预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的AUC为0.780,提示ANXA1对RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘有一定的预测价值,进一步验证上述研究结果。

NGAL是一种与中性粒细胞炎症相关的相对分子质量为25×103的糖蛋白,其因在各种炎症情况下升高,也被称为急性期蛋白,据报道,支气管哮喘患儿NGAL水平显著升高[19]。KAWAGOE等[20]研究表明,哮喘伴阻塞性通气缺损患儿的血清NGAL水平高于无阻塞性通气缺损的哮喘患儿。本研究也发现,NGAL水平在RSV感染致毛细支气管炎患儿血清中升高,在重度组中高于轻度组,提示NGAL与RSV感染致毛细支气管炎的严重程度有关。ALLAM等[21]发现,NGAL区分严重支气管哮喘患儿与非严重支气管哮喘患儿的灵敏度和特异度分别为82%和76%,其可能是重症儿童支气管哮喘的潜在标志物。本研究中,哮喘组NGAL水平高于非哮喘组,其是RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的独立危险因素,且预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的AUC为0.752,提示NGAL对RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘有一定的预测价值,与上述研究结果类似。进一步研究发现,ANXA1与RSV联合检测预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的AUC和灵敏度相较于单项检测均有提升,提示二者有望成为预测RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘的潜在因子。

综上所述,RSV感染致毛细支气管炎患儿血清NGAL、ANXA1水平均升高,其水平升高是RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘独立危险因素,二者联合检测对RSV感染致毛细支气管炎患儿继发哮喘有一定的预测价值。但本研究对其具体机制未有涉及,后续需对其进行深入研究。