刘海霞,魏小敏,王丽丽,杨玉侠,宋志慧

唐山市妇幼保健院产科,河北唐山 063003

妊娠期糖尿病是一种临床常见的疾病,主要是指患者在妊娠期出现的糖代谢异常现象[1],该病容易导致妊娠期发生不良结局,严重时影响母体和胎儿的生命安全,尽早预测不良妊娠结局十分重要[2]。临床上,可通过对孕妇进行临床监测,研究其血清指标对妊娠结局的影响,预测不良结局发生的风险,从而尽早开展治疗,减少妊娠期糖尿病所带来的风险[3],因此,寻找预测不良妊娠结局的生物标志物对妊娠期糖尿病孕妇的治疗具有重要的作用。微小RNA(miRNA)可以参与细胞的分化及增殖等过程[4],有研究发现miR-125b-5p表达水平在慢性肝炎中升高,随着病情的进展,其表达水平在进一步升高[5]。还有研究发现,miR-125b-5p在妊娠期糖尿病患者的血清中异常表达。分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)作为调节糖脂代谢的一种因子,其在肿瘤及肥胖等疾病中研究相对较多[6],有研究发现,SFRP5通过Wnt信号通路影响机体对胰岛素的敏感性,进而影响葡萄糖的代谢[7]。目前,关于miR-125b-5p和SFRP5在妊娠期糖尿病中的研究较少,因此,本研究主要探讨妊娠期糖尿病孕妇血清miR-125b-5p、SFRP5表达与妊娠结局的相关性,为临床治疗妊娠期糖尿病及预测不良妊娠结局提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月至2020年1月在本院诊治的120例妊娠期糖尿病孕妇作为研究组,年龄22～38岁,孕周24～28周。另选取同期孕检的健康孕妇118例为对照组,年龄21～37岁,孕周24～28周。记录研究组孕妇妊娠结局,根据是否出现早产、胎儿畸形、胎盘前置等不良结局将患者分为良好组(76例)和不良组(44例)。纳入标准:(1)入组患者符合相关诊断标准[8];(2)妊娠前无糖尿病及糖尿病家族史;(3)空腹血糖(FPG)≥5.1 mmol/L;(4)无免疫系统等疾病。排除标准:(1)合并重要器官障碍者;(2)合并肿瘤疾病者;(3)多胎妊娠者;(4)妊娠前存在高血压等疾病者。本研究经本院伦理委员会批准,所有受试者自愿入组并签署知情同意书。

1.2实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-125b-5p的表达水平 在孕24～28周进行妊娠期糖尿病筛查,对照组和研究组在孕检和入组当天均在空腹时采集外周静脉血5 mL,离心10 min(3 000 r/min),离心之后抽取上清液放至-80 ℃冰箱保存待测。按照Trizol试剂盒(上海羽哚生物科技有限公司,货号:LG-NE0260)说明书操作,提取血清中总RNA,总RNA浓度和纯度使用NanoDrop ND-12000分光光度计(美国Thermo公司提供)评估,使用M-MLV逆转录试剂盒(北京康纳瑞生物科技有限公司,货号:R3564)将RNA逆转录成cDNA,以cDNA为模板,采用qRT-PCR仪(购自美国Bio-Rad公司,型号:CFX384)检测miR-125b-5p的表达水平,内参为U6,引物序列见表1。qRT-PCR反应体系共20 μL:cDNA(50 ng/μL)2 μL,SYBR Green Master Mix(2×)(北京博沃尔斯生物科技有限公司,货号:G3326-01)10 μL,PCR正、反向引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20 μL。反应条件为95 ℃预变性15 min,1个循环,然后95 ℃ 15 s变性,65 ℃退火、延伸45 s,共40个循环。为减小实验误差,各样品重复3次,使用2-ΔΔCt方法计算miR-125b-5p的相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SFRP5水平 采用ELISA试剂盒检测血清SFRP5水平(货号:EH3754,武汉菲恩科技有限公司),按照配套说明书进行检测。

1.4血脂和血糖指标的检测 采集两组孕妇入组当天体检时餐后2 h的静脉血5 mL,离心10 min(3 000 r/min),置于-80 ℃冰箱保存待检。采用全自动生化分析仪(思科诺斯生物科技有限公司,货号:Catalyst One)检测FBG、餐后2 h血糖(2hFBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),采用全自动电化学发光分析仪(上海透景生命科技股份有限公司,货号:TESMI i100)检测空腹胰岛素(FINS),胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)则为FBG和FINS的乘积与22.5的比值。

2 结 果

2.1两组一般资料比较 研究组和对照组年龄、体质量指数(BMI)、HDL-C水平比较差异无统计学意义(P>0.05),研究组FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组一般资料比较

2.2两组血清miR-125b-5p、SFRP5水平比较 研究组血清miR-125b-5p表达水平高于对照组(P<0.05),血清SFRP5水平低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组血清miR-125b-5p、SFRP5水平比较

2.3血清miR-125b-5p和SFRP5水平与血糖、血脂指标的相关性分析 血清miR-125b-5p与SFRP5呈负相关(r=-0.563,P<0.05),血清miR-125b-5p与FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C呈正相关(r=0.523、0.475、0.587、0.641、0.432、0.510、0.631、0.536,P均<0.05),血清SFRP5与FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈负相关(r=-0.487、-0.463、-0.576、-0.412、-0.621、-0.569、-0.654、-0.682,P均<0.05)。

2.4不同妊娠结局孕妇血清miR-125b-5p、SFRP5水平比较 不良组血清miR-125b-5p表达水平高于良好组(P<0.05),血清SFRP5水平低于良好组(P<0.05)。见表4。

表4 不同妊娠结局孕妇血清miR-125b-5p、SFRP5水平比较

2.5影响妊娠期糖尿病不良妊娠结局的因素 以是否发生妊娠期糖尿病不良妊娠结局为因变量,以miR-125b-5p、SFRP5为自变量进行Logistic回归分析,结果显示,miR-125b-5p高表达、SFRP5低水平、HOMA-IR高及FINS高水平为妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。见表5。

表5 影响妊娠期糖尿病不良妊娠结局的因素

2.6血清miR-125b-5p、SFRP5水平对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的预测价值 miR-125b-5p预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI:0.820～0.915),最佳截断值为2.983,灵敏度为74.12%,特异度为88.32%。SFRP5预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.850(95%CI:0.799～0.902),最佳截断值为7.465 ng/mL,灵敏度为78.25%,特异度为83.14%。二者联合预测妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的AUC为0.948(95%CI:0.918～0.977),灵敏度为82.54%,特异度为76.56%。二者联合优于miR-125b-5p、SFRP5各自单独预测(P均<0.05)。见图1。

图1 血清miR-125b-5p、SFRP5水平对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的预测价值

FINS预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.766(95%CI:0.707～0.826),最佳截断值为4.994 mU/L,灵敏度为70.24%,特异度为86.32%。HOMA-IR预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.798(95%CI:0.742～0.855),最佳截断值为3.107,灵敏度为72.27%,特异度为82.32%。见图2。

图2 FINS和HOMA-IR对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的预测价值

3 讨 论

妊娠期糖尿病是临床常见的一种内分泌代谢紊乱疾病,机体的葡萄糖耐量出现异常,可能导致早产和畸形胎儿等不良妊娠结局[9]。随着社会的进步和人们生活水平的改善,妊娠期糖尿病患者逐年增加,严重威胁母婴生命健康[10]。因此,寻找与妊娠期糖尿病妊娠结局相关的标志物,可以指导临床早期进行干预以改善妊娠结局。

miRNA主要由20～25个核苷酸组成的RNA,其参与机体细胞的增殖、分化过程[11],在各种疾病的发生发展中起重要的作用[12],有研究发现,miRNA在糖尿病中发挥重要的作用,其可调控机体中内源性因子的产生和排出,从而对葡萄糖的摄取和储存等过程产生影响[13],miR-125b-5p表达上调可以促进胰岛素敏感性,还可以改善2型糖尿病患者肝脏糖脂代谢紊乱[14],研究发现,miR-125b在2型糖尿病患者血清中明显高于健康者,其表达水平可以辅助评估2型糖尿病患者的情况[15]。常凤霞等[16]通过检测乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清miR-125b-5p发现,miR-125b-5p表达水平在死亡组中明显高于生存组,其对于乙型肝炎慢加急性肝衰竭预后有一定的评估作用。在本研究中,研究组血清miR-125b-5p表达水平高于对照组,与上述研究结果相似。研究组FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平高于对照组,推测妊娠期糖尿病孕妇机体中脂代谢异常会导致胰岛素受体降低。进一步分析得知,不良组血清miR-125b-5p表达水平高于良好组,血清miR-125b-5p与FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C呈正相关,推测血清miR-125b-5p表达水平升高会影响孕妇机体中的脂质代谢,从而产生胰岛素抵抗,说明血清miR-125b-5p表达与妊娠期糖尿病的发生及不良妊娠结局密切相关。

SFRP5可在人体多种组织中出现高表达,其水平升高可以帮助机体脂肪组织的氧化及葡萄糖的摄取[17],SFRP5通常和脂肪的代谢功能异常密切相关,游离脂肪酸水平的不断升高会导致肝脏中脂类大量沉积,造成各种脏器功能受损,还会使血糖水平升高[18]。SFRP5作为Wnt信号通路的一种拮抗剂,其通路能够参与机体的多种细胞进程,当其通路出现异常时也会导致机体中脂肪代谢出现异常,使机体对胰岛素的敏感性异常[19]。孙东华等[20]的研究发现,妊娠期糖尿病患者SFRP5水平低于健康对照者,SFRP5水平可以预测妊娠期糖尿病患者的妊娠结局[21]。在本研究中,研究组血清SFRP5水平与对照组比较明显降低,进一步分析得知,不良组血清SFRP5水平与良好组比较明显降低,说明SFRP5水平的降低是胰岛素抵抗的特异性表现,其水平变化与妊娠期糖尿病的发展存在一定联系。相关性分析结果显示,血清SFRP5与FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈负相关,进一步证实SFRP5水平降低可以引起胰岛素抵抗,说明监测SFRP5可以评估妊娠期糖尿病的发生,其还与不良妊娠结局有关。血清miR-125b-5p、SFRP5呈负相关,说明二者可以共同调节妊娠期糖尿病的发生发展。

Logistic回归分析结果显示,影响妊娠期糖尿病不良妊娠结局的危险因素主要为miR-125b-5p高表达、SFRP5低水平、HOMA-IR高及FINS高水平,说明miR-125b-5p和SFRP5通过参与机体脂类代谢从而影响妊娠期糖尿病孕妇产生胰岛素抵抗,影响病情进展。miR-125b-5p预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.868,SFRP5预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.850,二者联合预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.948,二者联合优于miR-125b-5p、SFRP5各自单独预测,FINS预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.766,HOMA-IR预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的AUC为0.798,其AUC低于miR-125b-5p和SFRP5二者联合检测,说明miR-125b-5p和SFRP5二者联合能更有效地预测妊娠期糖尿病不良妊娠结局的发生。

综上所述,妊娠期糖尿病孕妇血清中miR-125b-5p高表达、SFRP5低水平,二者与不良妊娠结局有关,二者联合对妊娠期糖尿病不良妊娠结局有一定的预测价值。后续还会进行进一步的深入研究。