马 青,杨 敏,刘 英,王 月,李世军△

1.贵州省疾病预防控制中心,贵州贵阳 550004;2.贵阳市云岩区卫生健康局,贵州贵阳 550004

发热呼吸道症候群(FRS)是一类由呼吸系统急性感染引起的以发热及呼吸道症状为主要临床表现的疾病,其病原体复杂,流行广泛,易感人群众多,发展迅速,部分危重患者可发展为急性呼吸窘迫综合征甚至呼吸衰竭,最终死亡[1-3]。呼吸道感染的病原体种类繁多,除了常见的甲、乙型流感病毒之外,还有细菌、真菌、支原体、衣原体等,其病原谱受到年龄、性别、地域、气候、经济情况、卫生条件等多方面因素的影响,常见的细菌性感染性疾病是临床常见的感染性疾病,常根据临床经验诊断和用药[4]。因为不合理使用抗菌药物及介入性治疗增多,条件致病菌引起的呼吸道感染增多,感染程度随着细菌谱的变迁和其对抗菌药物的耐药性不断地增高,因此对呼吸道传染病的主要病原体进行准确及时地分析和检测十分重要[5-7]。本研究旨在对近年来贵阳市FRS病例细菌性病原体及其特征开展研究,分析病原谱的构成和病原体流行特征,为呼吸道传染病的预防和控制提供科学依据,提高呼吸道传染病的防控能力。

1 材料与方法

1.1标本来源 采集来自贵阳市妇幼保健院、贵阳市肺科医院、清镇市第一人民医院和贵阳市第五人民医院4家监测哨点医院2018年9月至2019年12月FRS患者的标本,采集155例患者共计381份标本,其中全血138份、痰液88份、鼻咽拭子155份。全血标本和痰液标本用于检测6种目标菌,鼻咽拭子标本用于肺炎支原体和肺炎衣原体的检测。

1.2全血、痰液标本的细菌性病原学检测 根据国家传染病监测技术平台项目《发热呼吸道症候群监测技术方案》,将全血培养液和痰液标本分别接种到血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基,经5% CO2培养箱放置24～48 h后,将可疑的目标菌(肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌和A组乙型链球菌)进行纯培养,再根据菌落形态、革兰染色镜检、氧化酶试验、触酶试验等进行初步鉴定,最后通过实时荧光定量PCR法对疑似目标菌核酸进行鉴定。所用试剂盒为深圳生科原生物有限公司生产的肺炎链球菌核酸测定试剂盒、金黄色葡萄球菌核酸测定试剂盒、肺炎克雷伯菌核酸测定试剂盒、铜绿假单胞菌核酸测定试剂盒、A组乙型链球菌核酸测定试剂盒和流感嗜血杆菌核酸测定试剂盒。

1.3鼻咽拭子标本的核酸检测 运用TaKaRa宝生物工程有限公司的MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0 试剂盒提取核酸,然后用深圳深科原有限公司生产的肺炎支原体和肺炎衣原体核酸测定试剂盒对人体鼻咽拭子标本中的病原体核酸进行实时荧光定量PCR法检测。

1.4统计学处理 使用Excel2019进行实验数据的整理,采用SPSS22.0软件对数据进行分析。计数资料以频数或百分率表示,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1患者基本情况 155例FRS患者中,男87例,女68例,分别占患者总数的56.13%和43.87%,男女性别比为1.28∶1.00。将155例患者按年龄分为5个年龄段:婴幼儿(0～6岁)52例;青少年(>6～17岁)9例;青年(>17～45岁)11例;中年(>45～68岁)36例;老年(>68岁)47例。155例患者共采集到381份标本,其中有88例患者均采集到3种标本(全血、痰液、鼻咽拭子);有50例患者均采集到血液和鼻咽拭子标本;有17例只采集到鼻咽拭子标本。

2.2不同标本病原体核酸检出情况 从155例患者采集到的381份标本中,未发现患者有混合感染的情况。88份痰液标本中15份检出病原体核酸,检出率为17.05%;138份全血标本中检出1株金黄色葡萄球菌核酸,且与痰液标本中检出的金黄色葡萄球菌不是来自同一例患者。155份鼻咽拭子标本中检出肺炎支原体核酸6份;不同标本的病原体核酸检出率比较,差异有统计学意义(χ2=28.047,P<0.05),以痰液标本病原体核酸检出率最高,为17.05%,全血标本病原体核酸检出率最低,为0.72%。见表1。

表1 不同标本病原体核酸检出率比较

2.3各类病原体核酸检出情况 138份患者标本(88例患者同时采集到全血和痰液,50例患者只采集到血液)应用分离培养方法进行检测,病原体核酸总检出率为11.59%(16/138);其中肺炎克雷伯菌核酸检出率最高,为4.35%;肺炎链球菌和铜绿假单胞菌核酸检出率均为2.17%,流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌核酸检出率均为1.45%。155份鼻咽拭子标本中6份检出肺炎支原体核酸,检出率为3.87%,未检出肺炎衣原体核酸。贵阳市FRS患者细菌性病原体核酸的检出主要以肺炎克雷伯菌(4.35%)、肺炎链球菌(2.17%)和铜绿假单胞菌(2.17%)为主。见表2。

表2 FRS患者各类病原体核酸检出情况

2.4不同性别、年龄患者的病原体核酸检出情况 从性别分布来看,男性患者病原体核酸检出率为16.09%(14/87),女性患者病原体核酸检出率为11.76%(8/68),不同性别患者病原体检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.587,P>0.05),但不同性别患者的构成比不同,男性患者较女性患者多。从年龄分布来看,不同年龄组患者病原体核酸检出率比较差异无统计学意义(χ2=3.182,P>0.05)。但各年龄组患者的构成比不同,病原体核酸检出情况也不同;以0～6岁和>68岁的患者数最多;以0～6岁年龄病原体核酸检出率最高,为21.15%,以肺炎支原体、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌为主;其次,>68岁年龄段病原体核酸检出率较高,为12.77%,病原体检出以肺炎支原体为主。见表3。

表3 FRS患者不同年龄病原体检出情况

3 讨 论

呼吸道症候群患者的常见病原体为肺炎支原体和肺炎衣原体,其均为苛养菌,培养环境条件苛刻,甚至不能进行培养[8],因此本研究直接采用实时荧光定量PCR法对人体鼻咽拭子标本中的病原体核酸进行检测。实时荧光定量PCR法检测过程中没有引物、探针之间的拮抗,检测结果更加准确可靠,样品的扩增和实时的测定都基本在一个完全封闭的检测体系中进行和完成,很大程度上降低了被细菌污染的可能性,并且对于扩增后的样品无需额外进行电泳等操作[9],为临床鉴别诊断和治疗细菌性呼吸道传染病提供了更多的病原学依据,与常用的传统检测方法相比灵敏度和特异度更高,对检测肺炎衣原体与肺炎支原体这些难以培养的苛养菌优势也更加显著[10]。

本研究结果显示,88份痰液标本中15份检出目标菌;138份全血标本中检出1株金黄色葡萄球菌且与痰液标本中检出金黄色葡萄球菌的患者不是同一例;155份鼻咽拭子标本中6份检出肺炎支原体核酸。不同标本病原体核酸检出率比较,差异有统计学意义(χ2=28.047,P<0.05),以痰液标本病原体核酸检出率最高,为17.05%,痰液标本的病原体核酸检出率明显高于全血标本,全血标本病原体核酸检出率最低,为0.72%。鼻咽拭子标本核酸检出率为3.87%,检出病原体以肺炎支原体为主,明显高于2012-2013年贵阳市同类研究报道[11]。儿童社区获得性肺炎和呼吸道感染常见的两种病原体为肺炎支原体和肺炎衣原体,且这两种病原体的联合检测在早期鉴别和诊断社区获得性肺炎中有一定的参考价值,应进一步引起临床的重视[12]。

138份患者标本(88例患者同时采集到全血和痰液,50例患者只采集到血液)中,病原体核酸总检出率为11.59%(16/138);其中肺炎克雷伯菌检出率最高,为4.35%;肺炎链球菌和铜绿假单胞菌检出率均为2.17%,流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌检出率均为1.45%。155份鼻咽拭子标本中共检出6份肺炎支原体,检出率为3.87%。通过分析各类病原体的检出结果可知FRS患者细菌性病原体的检出以肺炎克雷伯菌(4.35%)、肺炎链球菌(2.17%)和铜绿假单胞菌(2.17%)为主。与之前2012-2013年贵阳市的调查报道[11]显示的病原体检出率不同,呼吸道细菌性病原体核酸检出率前3位的结果也不太一致,提示该疾病的病原谱结构可能发生了变化。

从性别分布来看,不同性别患者病原体核酸检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.587,P>0.05),但男性患者较女性患者多。从年龄分布来看,不同年龄组患者病原体核酸检出率比较差异无统计学意义(χ2=3.182,P>0.05)。但各年龄组患者的构成比不同,病原体检出情况也不同;以0～6岁和>68岁的患者数最多;以0～6岁年龄病原体核酸检出率最高,为21.15%,且该年龄段病原体感染种类较复杂,以肺炎支原体、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌为主;其次,>68岁年龄段病原体核酸检出率较高,病原体检出以肺炎支原体为主。社区获得性肺炎可发生于任何年龄阶段,其中以低年龄段儿童及老年群体多发[13]。本研究中,肺炎支原体主要在0～6岁和>68岁患者中被检出,本研究也印证了以往研究结果[13]。肺炎支原体与肺炎衣原体是小儿肺炎的主要病原体,它们若长期在患儿体内没有得到及时清除,严重时可导致心肌炎、脑膜炎等严重疾病,提示该类病原体在免疫力低下群体中检出率高,临床治疗中应特别重视这类群体的病原体检测[14-15]。

综上所述,贵阳市2018年9月至2019年12月FRS患者常见细菌性病原体以肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌为主。该疾病的感染人群以0～6岁和>68岁人群多见,不同性别患者病原体检出率未见差异。通过分析贵阳市4家哨点医院监测FRS患者细菌性病原体结果,可以在一定程度上反映全市FRS患者发病特征和规律,为FRS病例监测和临床救治提供科学依据。