宁云云

（徐州市睢宁县人民医院检验科，江苏 徐州 221200）

乙型病毒性肝炎（乙型肝炎）在临床上具有较高的发病率。患者发病后可出现黄疸、消化道症状、肝区疼痛、肝脾肿大及肝纤维化等临床表现，少数患者还会出现发热症状。乙型肝炎久治不愈可导致患者病情恶化，进展为重型肝炎、肝硬化或肝癌，严重威胁患者的生命安全[1]。在乙型肝炎发病的早确给予明确诊断并及早治疗，可阻止疾病的进展，改善患者的预后。鉴于乙型肝炎病毒（乙肝病毒）具有较强的变异性，加之感染后早期症状缺乏特异性，容易被忽略，因此第一时间检出受检者是否感染乙肝病毒意义重大[2]。乙肝病毒目前的临床检测技术有酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、电化学发光免疫分析技术（Electrical chemiluminescent immunoassay，ECLIA）等，二者在临床上均有较高的使用率，但现阶段临床缺乏这两种检验技术效能的对比，在优先选择检验方案上仍有较多争议。基于此，本次研究将2018 年9 月至2021 年9 月徐州市睢宁县人民医院接诊的疑似乙型肝炎患者86 例作为研究对象，对比分析ECLIA、ELISA 在检测乙肝病毒感染血清标志物中的应用效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年9 月至2021 年9 月于徐州市睢宁县人民医院就诊的疑似乙型肝炎患者86 例作为研究对象。其中男44 例，女42 例；年龄22 ～68 岁，平均年龄（46.93±5.74）岁；体重43 ～77 kg，平均体重（51.23±5.73）kg。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：患者均表现为肝脏肿大、腹水、恶心、肝区疼痛等；患者及其家属对研究知情同意。排除标准：合并严重基础疾病者；存在精神、认知异常者；合并其他肝病者；处于特殊生理阶段（如哺乳者或妊娠期）者。

1.3 方法

1.3.1 ELISA 采集患者清晨空腹状态下的肘静脉血5 mL，进行离心处理（转速为3000 r/min，时间为10 min），分离出血清。取酶免疫吸附测试试剂，放置在室温环境中，等待30 min 后将血清滴入试剂的微孔反应条中进行封闭，然后在恒温水浴箱中放置1 h，将反应条取下，同时将条带上的液体清除干净，注意需要反复清洗5 遍，之后再次放回水浴箱中，等待30 min，取出并滴入终止液，使用酶标仪读取检测结果。

1.3.2 ECLIA 采集患者清晨空腹状态下的肘静脉血5 mL，进行离心处理（转速为3000 r/min，时间为10 min），分离出血清。将血清置入聚苯乙烯试管当中，以100 µL 的辣根过氧化酶实施抗体标记，再将其置于恒温环境中，保存2 h 后重复冲洗（以磷酸盐缓冲盐水为缓冲液）3 次，随后加入0.1 mol/L 氢氧化钠与30 mol/L 鲁米诺，放置10 min 左右，在雅培i2000 化学发光分析仪中进行血清学检测。

1.4 观察指标

以实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，RQ-PCR）的检测结果为“金标准”，比较ECLIA、ELISA 诊断乙肝病毒感染的效能，包括诊断的准确性、灵敏度、特异度。比较ECLIA、ELISA 对乙肝病毒感染血清标志物的阳性检出情况，血清标志物包括乙型肝炎病毒核心抗体（Hepatitis B virus core Antibody，HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗体（Hepatitis B virus surface Antibody，HBsAb）、乙 型肝炎病毒表面抗原（Hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎病毒e 抗体（Hepatitis B virus e Antibody，HBeAb）及乙型肝炎病毒e 抗原（Hepatitis B virus e antigen，HBeAg）。各指标在不同检测方法中的阳性判断标准如下：（1）ECLIA：以临界值指数（Cut off index，COI）为参照，若HBsAg、HBeAg的COI ≥1.0，则表示为阳性；若HBeAb、HBcAb的COI ＜1.0，则表示为阳性；若HBsAb 水平≥10 IU/L，则表示为阳性。（2）ELISA：以COI 为参照，若HBsAg、HBeAg、HBsAb 三项指标的COI ≥1.0，则表示为阳性；若HBeAb、HBcAb 两项指标的COI ＜1.0，则表示为阳性。

1.5 统计学方法

使用SPSS 22.0 统计软件分析数据，符合正态分布的计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料以%表示，采用χ²检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ECLIA、ELISA 诊断乙肝病毒感染的效能

对86 例患者进行RQ-PCR 检测的结果显示，其中乙肝病毒阳性患者75 例，阴性患者11 例；对86例患者进行ECLIA 检测的结果显示，其中乙肝病毒阳性患者73 例，阴性患者13 例；对86 例患者进行ELISA 检测的结果显示，其中乙肝病毒阳性患者67 例，阴性患者19 例。详见表1。ECLIA、ELISA 诊断乙肝病毒感染的准确性、灵敏度、特异度相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

表1 乙肝病毒的阳性检测结果

表2 ECLIA、ELISA 诊断乙肝病毒感染准确性、灵敏度、特异度的对比[例（%）]

2.2 ECLIA、ELISA 对乙肝病毒感染血清标志物的阳性检出情况

ECLIA、ELISA 在HBsAb、HBcAb 的 阳 性 检出率方面相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；ECLIA 对HBsAg、HBeAb、HBeAg 的 阳 性 检 出 率分 别 为82.67%、38.67%、40.00%，均 高 于ELISA的68.00%、18.67%、21.33%，差异有统计学意义（χ²=4.341、7.335、6.145，P均＜0.05）。详见表3。

表3 ECLIA、ELISA 对乙肝病毒感染血清标志物的阳性检出情况[例（%）]（n=75）

3 讨论

乙型肝炎是一种传染性较强的疾病，由乙肝病毒感染所致。乙型肝炎如不及时诊治，会导致肝脏出现严重病变，极大危害患者的生命健康。对乙肝病毒感染人群进行血清标志物检测，是当前临床筛查乙型肝炎的常用手段[3]。例如，当患者的血清HBsAg 呈阳性时，表明其机体已经感染了乙肝病毒，因为人体在感染乙肝病毒后会产生一定量的抗-HBs 抗体，该抗体可以在机体感染乙肝病毒后启动自我保护功能，因此当该指标呈阳性时，表示机体出现了免疫反应。另外，当人体感染乙肝病毒后，肝细胞会产生HBeAg，当该指标呈阳性时，说明患者的病情已经发展至病毒复制活跃的阶段，该阶段乙肝病毒的传染性极强[4]。HBsAg 是乙肝病毒的外壳蛋白，虽不具传染性，但该指标呈阳性是机体感染乙肝病毒的重要标志之一。HBcAb 是一种免疫球蛋白，由乙肝核心抗原刺激肝细胞产生，不会对人体起到保护作用，该指标主要反映的是人体内乙肝病毒的活动情况，HBcAb 水平越高，说明病毒的传染性越强，该指标可以长期甚至终生保持阳性。综上，通过检测乙肝病毒血清标志物，可以实现在乙型肝炎的早期诊断，为后续治疗提供科学依据。从当前临床常用的乙肝病毒血清学检验方法来看，ELISA、ECLIA 的使用率最高，已在临床上得到推广。大量研究指出，ECLIA 不仅扩大了临床检验的适用范围，还优化了操作步骤，且重复性较好，反应时间短，可以在较短的时间内获得结果，被临床广泛认可[5]。患者在感染乙肝病毒的早期，血液中可检出HBsAg，此时临床通常优先使用ECLIA 进行HBsAg 检验[6]。ELISA 用于乙肝病毒血清学检验的原理是利用抗体与抗原存在的特异性，当待测血清与酶结合时会产生特异性反应，最后完成目标检测，其具体原理如下：（1）患者血清中的抗原或抗体可以与酶产生连接，形成具有较好免疫活性和较高活力的酶标抗原和抗体。（2）当患者体内产生抗原和抗体时，可与特定的固相载体黏附，保证了其活性，且不会被轻易破坏。ELISA 的检测速度较快且检测成本低，故其在既往的临床病毒检测中得到了广泛应用，并且有较高的安全性，不会破坏环境及造成机体损伤。但从整体上来看，ELISA 的灵敏度要比ECLIA 差一些，在临床检验中漏诊或假阳性的问题时有发生[7]。ECLIA作为一种新型的检验技术，充分结合了电化学发光和免疫检验两种检验方式的优势，并借助电化学发光剂来标记受检者体内的抗体，然后经分离技术精准分离抗原与抗体，对于乙型肝炎具有较高的检出率[8]。另外，ECLIA 的特点在于重复性较好，通过有效利用电磁铁效应来实现自动化检验操作，不仅可以减少人为操作产生的误差，提高检测的精确度，还可以避免出现标本处理不当的情况，预防标本溶血或污染对检测结果的影响，在准确检测血清学相关指标的阳性反应中有较高的应用价值[9]。本研究对比分析了ECLIA、ELISA 在检测乙肝病毒感染血清标志物中的应用效果，结果显示，ECLIA、ELISA 诊断乙肝病毒感染的准确性、灵敏度、特异度相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；ECLIA、ELISA 在HBsAb、HBcAb 的阳性检出率方面相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；ECLIA 对HBsAg、HBeAb、HBeAg 的 阳 性 检 出 率分 别 为82.67%、38.67%、40.00%，均 高 于ELISA的68.00%、18.67%、21.33%，差异有统计学意义（χ²=4.341、7.335、6.145，P均＜0.05）。在常楠[10]的研究中，疑似乙肝病毒感染患者采用ECLIA 检测HBsAg、HBeAb、HBeAg 三项血清标志物，阳性检出率分别为97.87%、44.68%、55.33%，明显高于ELISA检 测 的80.00%、22.22%、28.89%（P＜0.05），但ECLIA 与ELISA 对HBsAb、HBcAb 两项血清标志物的阳性检出率对比无显著差异（P＞0.05），这与本研究结果相一致。由此可见，ECLIA 在乙肝病毒感染血清标志物检测中的应用效果优于ELISA。本研究的局限性在于纳入的样本量较小，可能因个体差异对研究结果产生影响，在今后的工作中将继续收集更多的患者资料进行统计分析，为乙型肝炎的准确诊断提供参考。

综上所述，在HBsAg、HBeAb、HBeAg 的阳性检出方面，ECLIA 优于ELISA，因此，对于疑似乙型肝炎的患者可优先选择ECLIA 进行血清学检验，有利于诊断患者的病情，为后续尽早展开治疗提供科学依据，值得推广。