孙瑞卿, 王 霞, 李晋栋, 秦 曙

(山西农业大学山西功能农产品检验检测中心,农业农村部农产品质量安全风险评估实验室 (太原),山西 太原 030031)

农药残留试验开展过程中,因外地试验样品寄送过程耗时长,样品无法保证在完全冷冻状态下运送至实验室,因实验室人力、资源限制无法及时处理或检测试验样品[1-2]的情况也偶有发生,有研究证实农药本身性质[3]、环境温度[4]、储存时间、基质差异[5]等因素均可能对样品基质中待测农药的稳定性产生影响,从而不能真实、客观、准确的反映待测农药的含量[6-7]。因此,研究农药在储藏、运输、检测过程中的储藏稳定性[8]显得尤为重要。

联苯肼酯是美国科聚亚公司研制的产品,于2008年在我国获得登记,主要用于防治苹果和葡萄上的红蜘蛛和二斑叶螨,也用于防治观赏植物上的二斑叶螨。联苯肼酯是一种新型选择性叶面喷雾用杀螨剂[9],其作用机理为对螨类的线粒体电子传递链复合体III抑制剂的独特作用,其对螨的各个生活阶段有效,具有杀卵活性和对成螨的击倒活性(48～72 h),且持效期长,持效期14 d左右,推荐使用剂量范围内对作物安全,对寄生蜂、捕食螨、草蛉低风险[10]。农药残留联席会议 (JMPR) 2006年的残留试验报告显示,联苯肼酯风险评估定义为联苯肼酯及联苯肼酯-二氮烯之和,以联苯肼酯表示[11]。

为了明确联苯肼酯及其代谢物在苹果基质中的稳定性,本研究通过建立高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)分析测定苹果中联苯肼酯及其代谢物,探讨了联苯肼酯及其代谢物在苹果残留试验样品中冷冻条件下的储藏稳定性、模拟运输过程中的稳定性及样品提取液的稳定性,以期为苹果中联苯肼酯及其代谢物的残留检测分析及准确定量分析提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

试验样品均采自试验基地。标准品联苯肼酯和联苯肼酯二氮烯生产厂家为Dr. Ehrenstorfer GmbH,甲酸(LC-MS,>99.0%)、乙酸(HPLC,>99.7%)和乙腈(LC-MS,>99.9%)均购自赛默飞世尔有限公司,乙腈(HPLC,<99.5%)购自天地有限公司,甲醇(LC-MS,>99.9%)购自默克股份有限公司,净化管购自岛津技迩有限公司,乙酸铵(色谱纯,>99.0%)和抗坏血酸(A.R.,≥99.7%)购自天津光复有限公司,氯化钠(A.R.,≥99.5%)购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器设备

UPLC-MS/MS(美国沃特世有限公司),超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),电子天平(美国奥豪斯上海有限公司),离心机(德国Eppendorf有限公司),刀式研磨仪(德国Retsch有限公司),涡旋混合仪(莱普特仪器有限公司)。

1.3 试验方法

1.3.1 样品制备

称取13份10 g苹果空白样品于离心管中,取4份添加联苯肼酯标准溶液,另取4份添加联苯肼酯-二氮烯标准溶液,添加浓度均为0.1 mg/kg,混匀后作为模拟运输过程稳定性试验和样品提取液稳定性试验样品,其余样品作空白样品,于≤-18 ℃冰箱中冷冻保存。

1.3.2 取样分析

模拟运输过程稳定性试验：在检测的前一天,各取2份联苯肼酯、2份联苯肼酯-二氮烯的样品,放置于冷藏冰箱(1～5 ℃)储藏24 h后,与冷冻的各2份样品一起进行提取检测。冷藏样品作为模拟运输过程中的样品,通过对比冷藏样品相对于冷冻样品的降解率模拟分析样品在运输过程中的稳定性。

样品提取液稳定性试验：取1份联苯肼酯、1份联苯肼酯-二氮烯的添加样品进行提取,提取液分为4份于进样小瓶中,2份当天检测,另外2份置于≤-18 ℃冷冻冰箱中保存,48 h后取出检测,分析测定提取液储藏期间的稳定性。

1.3.3 样品处理方法

称取粉碎的苹果样品10 g于离心管中,加入10 mL乙腈,涡旋提取10 min后加入5.0 g氯化钠,继续涡旋5 min,5 000 r/min离心3 min,取上清液加入盛有150 mg无水硫酸镁和25 mg C18的净化管中,2 500 r/min涡旋3 min,5 000 r/min离心2 min,上清液过膜后进UPLC-MS/MS分析联苯肼酯。另取1 mL上清液加入1 mL0.5%抗坏血酸水溶液,超声15 min,过膜后进UPLC-MS/MS分析联苯肼酯及联苯肼酯-二氮烯之和(以联苯肼酯计)。

2 结果与分析

2.1 储藏稳定性结果

经查询,JMPR于2006年对联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯的储藏稳定性进行了评估,评估结果见表1。评估结果显示,于苹果空白样品中分别添加0.1 mg·kg-1联苯肼脂和联苯肼脂-二氮烯标准溶液,0 d时剩余残留量分别为0.090 mg·kg-1和0.076 mg·kg-1,第224天时联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯在苹果中的残留量在冷冻条件(-24～-20 ℃)下仍是稳定的。因此,联苯肼酯在苹果上的残留试验样品从采集到检测的最长储藏时间为224 d,若没有超过有效储藏期,储藏期间不会对样品的残留量产生影响。

表1 苹果中联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯残留冷冻(-24～-20℃)储藏稳定性结果

2.2 模拟运输过程中储藏稳定性结果

联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯在苹果中模拟运输过程储藏稳定性数据结果见表2。结果表明,在1～5 ℃下储藏24 h,苹果中联苯肼酯的降解率为0,联苯肼酯-二氮烯的降解率为12.0%,均小于30%,说明此条件下残留量是稳定的。

表2 联苯肼酯及联苯肼酯-二氮烯在苹果中模拟运输过程储藏稳定性结果

2.3 样品提取液稳定性结果

联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯在苹果中样品提取液稳定性数据结果见表3。结果显示,苹果样品的提取液置于-24～-20 ℃冰箱中冷冻保存48 h,联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯的降解率分别为8.3%和8.0%,说明此条件下残留量是稳定的。

表3 联苯肼酯及联苯肼酯-二氮烯在苹果提取液的储藏稳定性结果

3 结论

本研究表明,储藏时间、储藏温度均会对联苯肼酯及其代谢物在苹果中的残留量产生影响。根据JMPR 2006年报告,-24～-20 ℃冷冻条件下联苯肼酯和联苯肼酯-二氮烯在苹果中的残留量在224 d内是稳定的,在模拟运输过程中1～5 ℃的储藏条件下24 h之内是稳定的,样品提取液在-24～-20 ℃的储藏条件下储藏48 h是稳定的。因此,苹果联苯肼酯农药残留试验样品从采集到检测的储藏时间最长不能超过224 d,所有样品运输到实验室时温度需控制在5 ℃以下,样品提取液须在48 h之内完成检测,可确保检测结果准确可靠。