庞元美 卢红梅 王斌 覃培松 韦燕清 韦雪

（1.广西警察学院，广西 南宁 530028；2.广西农业职业技术大学，广西 南宁 530007）

金桂花（Osmanthus fragransvar. thunbergii Makino）属木犀科木犀属植物 ，广泛栽种于南方地区，药材资源非常丰富。为温带树种，叶对生，叶面光滑，多呈椭圆或长椭圆形，花簇生，金黄色，味香持久。药食同源，可观赏、食用和药用；花常用于制作点心，酿酒，茶水及香料等；有药用价值的部分主要为桂花的花、果实及种子等。［1］古有记载：“治筋骨疼 痛，气痛，散郁”和 “贴牙痛，取桂树根上皮用”等。现代研究表明桂花有抗氧化、增强免疫、调节血脂、抗菌、抗癌、抗氧化及护肺等功效。［2-8］民间在风 火牙疼方面有用桂花根茎来治疗。目前大多数的报道主要是对桂花的根茎叶进行了研究，有关桂花干花进行研究的报道极少。本研究采用最大耐受剂量、醋酸扭体法及耳廓肿胀法，探讨金桂花干花提取物的急性毒性及镇痛、抗炎作用，以期为金桂花的开发提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

昆明种小鼠，SPF级别，每只体重18~22 g，雌雄兼用，购自广西医科大学实验动物中心。

1.1.2 试剂

二甲苯（批号：2020年3月5日，天津市富宁精细化工）；无水乙醇（批号：170505，西陇科学）；冰醋酸（批号：20170221，广东光华科技）。

1.1.3 药材

金桂花干花提取物采摘自广西境内；阿司匹林肠溶片（批号：191203，舒泰神生物制药）；生理盐水（四川科伦药业）。

1.1.4 仪器

电子天平（FB203C，上海佑科仪器仪表）；电热套（KDM型，山东鄄城华鲁）；循环水式真空泵（SHZ-D（Ⅲ），上海惊精其仪）；Dura超纯水仪（上海和泰仪器）；旋转蒸发仪（RE-2000B，上海亚荣）；打孔器（直径0.6 cm）。

1.2 实验方法

1.2.1 金桂花干花提取物的制备

称取金桂花干花500 g，用4 L、60%乙醇浸泡48 h。用旋转蒸发仪回流提取2 h，过滤除去药渣，合并提取液。提取液在50℃减压回收乙醇，浓缩得浸膏113.12 g，4℃冰箱保存备用。

1.2.2 药物给药浓度的配制

金桂花干花提取物低剂量组、中剂量组及高剂量组分别1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg，用生理盐水配制成低、中及高三种不同的浓度，即分别为0.05 g/mL、 0.1 g/mL及0.2 g/mL。阿司匹林肠溶片去外层包衣后研成细粉，成年人用量0.75~1.5 g/次，体重 70 kg，再根据动物剂量换算方法计算，小鼠给药剂量范围为0.132~0.264 g/kg/次，本次实验阿司匹林阳性对照组设计为0.15 g/kg，用生理盐水配置成7.5 mg/mL。［9］

1.2.3 急性毒性实验

预试验结果显示金桂花干花提取物毒性极低，故本实验采用最大耐受剂量进行正式实验［10］，取20 只健康小鼠，雌雄各半，按性别和体重随机分为两组，金桂花干花提取物给药组和生理盐水组，给药组剂量为5 g/kg，配成0.25 g/mL浓度，两组小鼠按0.2 mL/10 g灌胃给药，连续观察14天，每天观察和记录小鼠的活动、精神状态、摄食量、体重变化、排泄物及死亡等方面情况。观察期满将存活的小鼠处死，解剖并用肉眼观察各主要器官（心、肝、肺、肾及脾等）的情况。

1.2.4 醋酸扭体法实验［11］

小鼠60只，随机分为5组，每组12只，即生理盐水组、阿司匹林阳性对照组，三组金桂花干花提取物不同给药组（即低剂量组、中剂量组及高剂量组）。每天称重小鼠一次，每只小鼠按体重灌胃给药，0.2 mL/10 g给予相应的药，生理盐水组给予生理盐水，连续7 d。末次给药30 min后，用浓度为0.6%的新配制的醋酸溶液对小鼠进行腹腔注射，每只小鼠注射0.2 mL，记录小鼠的扭体反应数量，记录15 min，并计算小鼠的扭体抑制率，即疼痛抑制率。

疼痛抑制率（%）=（生理盐水组平均扭体次 数—给药组平均扭体次数）/生理盐水组平均扭体次数×100%。

1.2.5 耳廓肿胀法实验［12］

小鼠60只，随机分为5组，每组12只，即生理盐水组、阿司匹林阳性对照组，三组金桂花干花提取物不同给药组（即低剂量组、中剂量组及高剂量组）。每天称重一次，每只小鼠按体重灌胃给药，0.2 mL/只给予相应的药，生理盐水组给予生理盐水，按连续7 d。末次给药1 h后，各组小鼠分别于左耳两面均匀涂抹0.03 mL二甲苯，右耳不做处理，作为对照。1 h后颈椎脱臼处死小鼠，先用剪刀把左右耳剪下，用打孔器（直径0.6 cm）在左右耳同一位置分别对各组小鼠打孔取耳片，每个耳片为圆形，称量重量并记录，计算肿胀度和肿胀抑制率。肿胀度等于每只小鼠左耳片与右耳片重量 相减。

肿胀抑制率（%）=（生理盐水组肿胀度平均 数—给药组肿胀度平均数）/生理盐水组肿胀度平均数×100%。

1.2.6 统计学数据处理

采用Excel统计进行统计学处理，结果以（±s） 表示，采用t检验组间比较。

2 结果与分析

2.1 急性毒性实验结果

与生理盐水组比较，在14 d内观察期间给药组小鼠的活动、摄食量、尿液及粪便无异常，体重的增长正常，精神较好，无死亡现象。解剖结果显示各主要器官均未发现有任何肉眼可见的异常。实验结果见表1。

表1 金桂花干花提取物对小鼠体重变化的影响（ ±s）

表1 金桂花干花提取物对小鼠体重变化的影响（ ±s）

组别 剂量（g/kg） 小鼠数（只）性别 药前体重（g）7天后体重增加值（g）14天后体重增加值（g）-生理盐水组5 ♂ 20.38±1.1 5.57±0.9 5.33±1.4-5 ♀ 20.41±1.0 6.01±1.1 5.92±1.5给药组 5 5 ♂ 20.12±0.9 5.39±0.8 5.02±1.3 5 5 ♀ 20.07±1.2 5.74±1.3 5.17±1.0

2.2 金桂花干花提取物对醋酸诱导小鼠疼痛反应的影响

与生理盐水组比较，金桂花干花提取物低剂量组、中剂量组及高剂量组均能减少小鼠扭体反应次数，低剂量组和中剂量组有显著性差异（P＜0.05），疼痛抑制率分别为31.10%和46.01%，高剂量组有非常显著性差异（P＜0.01），疼痛抑制率较高，为50.35%，且随着剂量的增大，疼痛抑制率逐渐增强。结果提示实验药物对醋酸诱导的小鼠疼痛反应具有较强抑制作用，且与剂量呈正相关。实验结果见表2。

表2 金桂花干花提取物对小鼠的镇痛作用（ ±s）

表2 金桂花干花提取物对小鼠的镇痛作用（ ±s）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（g/kg） 小鼠数（只） 扭体反应数量（次） 镇痛率（%）生理盐水组 - 12 38.23±3.0 -阿司匹林组 0.15 12 20.12±2.6* 47.37低剂量组 1 12 26.34±2.7* 31.10中剂量组 2 12 20.64±3.2* 46.01高剂量组 4 12 18.98±1.8** 50.35

2.3 金桂花干花提取物对二甲苯诱导小鼠炎症反应的影响

与空白对照组比较，金桂花干花提取物低剂量组、中剂量组及高剂量组均能减轻小鼠肿胀度，低剂量组和中剂量组有显著性差异（P＜0.05），肿胀抑制率分别为35.33%和41.48%，高剂量组有非常显著性差异（P＜0.01），肿胀抑制率较高，为62.80%，且剂量越大，肿胀抑制率越强。提示实验药物对小鼠炎症反应具有较强抑制作用，且与剂量呈正相关系。实验结果见表3。

表3 金桂花干花提取物对小鼠的抗炎作用（ ±s）

表3 金桂花干花提取物对小鼠的抗炎作用（ ±s）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（g/kg） 小鼠数（只） 平均肿胀度（mg） 肿胀抑制率（%）生理盐水组 - 12 11.21±1.7 -阿司匹林组 0.15 12 6.34±2.1** 43.44低剂量组 1 12 7.25±1.5* 35.33中剂量组 2 12 6.56±2.7* 41.48高剂量组 4 12 4.17±2.0** 62.80

3 讨论

非甾体抗炎药的解热、镇痛、抗炎及抗风湿等方面的疗效确切，至今已有100多年应用历史，绝大多数药物属于非处方药，在临床治疗中应用非常广泛，但也是一类不良反应发生较多的药物。［13］开发出效果好且不良反应较少的新型非甾体抗炎药是研究方向。

急性毒性试验中小鼠的活动、摄食量、尿液及粪便无异常，体重的增长正常，精神较好，无死亡现象，初步结果表明金桂花干花提取物未显示出明显急性毒性，基本无毒。醋酸扭体法和耳廓肿胀法实验表明，金桂花干花提取物在低剂量组、中剂量组及高剂量组（1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg）下均可较明显减少醋酸诱导的小鼠扭体反应次数和减轻二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀度，提高疼痛抑制率和肿胀抑制率，提示其具有较强的镇痛及抗炎作用，且作用与剂量呈正相关系。金桂花干花提取物的镇痛抗炎作用与阿司匹林相比，显示出更好的镇痛及抗炎药效活性。对于金桂花干花提取物尚未确定和阐明的活性成分及作用机制，值得做进一步研究及开发。