里艳茹，黄胜男，寻园，程林友，谢百波，*（1.中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，天然活性物质与功能国家重点实验，北京 100050；.北京慧宝源生物技术股份有限公司，北京 1006；.中国中医科学院广安门医院南区，北京 10618；.广西慧宝源医药科技有限公司，广西 钦州 55008）

润楠属（Machilus）植物为常绿乔木或灌木，在全世界约有100 余种，分布于亚洲东南部和东部的热带、亚热带，中国西南部及印度为其主要产地。我国约有68 种3 变种，产于长江流域及以南各省区和山东东部，以云南和华南为主要产地，是当地主要的经济林木[1]。粗壮润楠为高大乔木，树皮粗糙，灰黑色。我国主要分布于云南南部、贵州南部、广西、广东[2]。润楠属植物资源丰富，在我国民间作为草药广泛使用，具有温中顺气、舒筋活血、消肿止痛等较强的生物活性，治疗各种皮肤病和风湿性疾病，临床上用于治疗胃呆食少、腹胀、腹泻、扭挫伤等[3]。前文主要报道了粗壮润楠中的木脂素和苷类化合物的分离和结构鉴定及其神经细胞保护和保肝活性[4-6]。本文继续报道该植物化学成分的分离和结构鉴定及其活性筛选结果。

1 材料

Perkin-Elmer 343 型旋光测定仪；美国Varian 公司Mercury-300、Mercury-400、Inova-500 或SYS-600 核磁共振仪（测定温度297 K，以溶剂峰信号作为参照）；Micromass Autospec-Ultima ETOF 型质谱仪和 Q-Trap LC/MS/MS（Turbo Ionspray source）型质谱仪（Waters 公司）；R-205 型旋转蒸发仪（Buchi公司）；闪式快速分离系统（AB SCIEX 公司）；Waters 600 高效液相色谱仪和Agilent HP 1100、1200型高效液相色谱仪；柱色谱硅胶（200～300目）（青岛海洋化工厂）；高效制备薄层硅胶板（HSGF）（烟台江友硅胶发展有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Amersham Pharmacia 公司）；MCI Gel CHP-20 树脂（70～150 μm）（日本三菱公司）；Thermo SKANIT SOFTWARE 3.2（Thermo 公司）；DMEM及马血清（Gibco 公司）；胎牛血清（Hyclone 公司）；细胞株PC12 细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。

植物样品采自广西壮族自治区大瑶山，经广西林业局龙光日工程师鉴定为粗壮润楠Machilus robusta，标本现存于中国医学科学院药物研究所标本室，标本号为（No.041）。

2 提取与分离

称取粉碎干燥的粗壮润楠茎皮5.3 kg，用95%乙醇45 L 于室温浸渍提取3 次，每次48 h。提取液减压浓缩，得干浸膏535.0 g，混悬于2000 mL 水中，用乙酸乙酯萃取（8×2000 mL），乙酸乙酯萃取部分（261.0 g）进行硅胶柱（100～200目，1000 g，8 cm×100 cm）色谱分离，用石油醚-丙酮（100∶0～0∶100）梯度洗脱，最后用甲醇洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，TLC 暗斑在紫外灯254 nm 或365 nm 下观察，通过碘熏或喷5%硫酸乙醇溶液后加热显色检测。合并组成相似的流分，回收溶剂得到9 个部分（Fr.A～Fr.I）。

Fr.B（石油醚-丙酮＝20∶1 洗脱）部分析出红色针晶，经过滤，用石油醚反复洗涤得到化合物6（2 mg）。剩余Fr.B 母液减压蒸干（17.5 g），经硅胶柱（200～300 目，150 g）色谱分离，石油醚-乙酸乙酯（100∶5～100∶20）梯度洗脱得到5 个洗脱部分（B1～B5），B1经Sephadex LH-20柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝5∶5∶1 洗脱）分离纯化析出白色结晶，经石油醚-丙酮重结晶纯化得化合物14（5053 mg），B2硅胶柱色谱分离（石油醚-乙酸乙酯＝50∶1 洗脱），经反相HPLC 半制备色谱（MeOH-H2O＝91∶9）洗脱，分离纯化得化合物10（2.5 mg）和11（1.6 mg）。B3部分经反相Flash 柱色谱分离，50%～100%甲醇水溶液洗脱得到6 个亚组分（B3-1～B3-6）。B3-2部分析出白色结晶，经石油醚-丙酮重结晶纯化得化合物15（25 mg）和16（20 mg）。B4经Sephadex LH-20柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝5∶5∶1 洗脱）分离纯化，再经反相HPLC 半制备（C18，5 μm，10 mm×250 mm）色谱，以MeOH-H2O（89∶11）为流动相，制备纯化得到化合物8（2 mg）。B5经硅胶柱色谱 [氯仿-丙酮（0%～100%）]洗脱，得到B5-1～B5-4。B5-2经Sephadex LH-20 柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝5∶5∶1 洗脱）分离纯化，得到B5-2-1～B5-2-11，B5-2-3再经反相HPLC 半制备（C18，5 μm，10 mm×250 mm） 色谱，以MeOH-H2O（93∶7）为流动相，制备纯化得到化合物3（1.5 mg）和4（2 mg）。Fr.C（70 g）经MCI 凝胶柱色谱（以30%～100%甲醇梯度洗脱），除去色素，分成两部分C1和C2，C2部分经硅胶柱色谱分离（石油醚-乙酸乙酯＝50∶1 洗脱），经反相HPLC 半制备色谱（MeOH-H2O＝95∶5 洗脱）分离纯化得化合物1（1.0 mg）和2（3.0 mg）。

Fr.D（2.0 g）经MCI 凝胶柱色谱（30%～100%甲醇梯度洗脱），分成6 个部分（D1～D6）。D5部分经反复硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯体系洗脱）和反相HPLC 半制备色谱（MeOH-H2O系统洗脱）分离纯化得到化合物5（2.0 mg）。

Fr.E（15.0 g）经MCI 凝胶柱色谱（10%～100%甲醇梯度洗脱）得到5 个部分（E1～E5）。E1部分经Sephadex LH-20 柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝2∶2∶1）洗脱，分离纯化得到化合物19（4.1 mg）。E2部分再经反相Flash 柱色谱分离，30%～70%甲醇水溶液洗脱得到3 个洗脱部分（E2-1～E2-3），E2-1经反相HPLC 半制备（C18，5 μm，10 mm×250×250 mm）色谱，以MeOHH2O＝8∶2 为流动相，制备纯化得到化合物12（1.0 mg）和13（1.1 mg）。E4反复经Sephadex LH-20 柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝2∶2∶1）洗脱，得到化合物17（4.5 mg）和18（3.0 mg）。E5经Sephadex LH-20 柱色谱（石油醚-氯仿-甲醇＝2∶2∶1）洗脱，再经反相HPLC 半制备色谱（MeOH-H2O＝58∶42 洗脱）分离纯化得到化合物9（1.1 mg）。

Fr.F（25.0 g）经MCI 凝胶柱色谱（10%～100%甲醇梯度洗脱），分成5 个部分（F1～F5）。F3部分经Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇＝5∶1）洗脱，分离纯化得到化合物7（5.0 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色结晶（氯仿）；ESI-MSm/z465 [M＋Na]＋；1H NMR（500 MHz，CDCl3）δ4.84（2H，s，H-26a，H-27a），4.56（2H，s，H-26b，H-27b），3.25（2H，dd，J＝11.5，4.0 Hz，H-3 和H-21），2.41（2H，d，J＝13.0 Hz，H-5 和H-15），1.97（2H，dt，J＝13.0，5.0 Hz，H-7 和H-15），1.75（2H，m，H-6 和H-16），1.72（2H，m，H-1 和H-19），1.67（2H，m，H-2 和H-20），1.57（2H，m，H-10 和H-18），1.55（2H，m，H-6 和H-16），1.53（2H，m，H-11 和H-12），1.38（2H，m，H-1 和H-19），1.11（2H，m，H-5和H-17），0.99（2H，s，H-23 和H-30），0.76（2H，s，H-24 和H-29），0.64（2H，s，H-25 和H-28）；13C NMR（125 MHz，CDCl3）δ37.0（C-1和C-19），28.0（C-2 和C-20），78.9（C-3 和C-21），39.1（C-4 和C-22），54.7（C-5 和C-17），24.0（C-6 和C-16），38.3（C-7 和C-15），148.4（C-8 和C-14），57.6（C-9 和C-13），39.3（C-10和C-18），22.6（C-11 和C-12），28.3（C-23 和C-30），15.4（C-24 和C-29），14.5（C-25 和C-28），106.7（C-26 和C-27）。上述数据与文献[7-8]报道的α-芒柄花萜醇数据基本一致，确定化合物1 为α-芒柄花萜醇。

化合物2：白色无定形粉末；（－）-ESIMSm/z455 [M-H]－；1H NMR（500 MHz，pyridine-d5）δ5.49（1H，brs，H-12），3.46（1H，m，H-3），2.64（1H，m，H-18），1.24（3H，s，H-27），1.23（3H，s，H-26），1.05（3H，s，H-23），1.00（3H，d，J＝6.5 Hz，H-30），1.00（3H，s，H-25），0.95（3H，d，J＝6.0 Hz，H-29），0.88（3H，s，H-24）；13C NMR（125 MHz，pyridine-d5）δ39.2（C-1），28.0（C-2），77.9（C-3），38.9（C-4），55.6（C-5），18.6（C-6），33.4（C-7），39.8（C-8），47.9（C-9），39.2（C-10），17.3（C-11），125.4（C-12），139.1（C-13），42.3（C-14），28.6（C-15），24.7（C-16），47.9（C-17），53.4（C-18），39.3（C-19），37.3（C-20），30.9（C-21），37.1（C-22），28.5（C-23），16.4（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），23.7（C-27），179.9（C-28），23.4（C-29），21.2（C-30）。以上数据与文献[9-10]报道的熊果酸的数据基本一致，确定化合物2 为熊果酸。

化合物3：白色结晶（氯仿）；ESI-MSm/z455 [M-H]－；1H NMR（500 MHz，CDCl3）δ3.19（1H，dd，J＝11.0，4.5 Hz，H-3），3.00（1H，ddd，J＝10.0，10.0，6.0 Hz，H-19），0.94（3H，s，H-23），0.75（3H，s，H-24），0.82（3H，s，H-25），0.97（3H，s，H-26），0.98（3H，s，H-27），4.61，4.74（each，1H，brs，H2-29），1.67（3H，s，H-30）；13C NMR（125 MHz，CDCl3）δ38.8（C-1），27.4（C-2），79.0（C-3），38.7（C-4），55.3（C-5），19.4（C-6），34.3（C-7），40.7（C-8），50.5（C-9），37.2（C-10），20.8（C-11），25.5（C-12），38.4（C-13），42.4（C-14），30.5（C-15），32.1（C-16），56.2（C-17），46.9（C-18），49.3（C-19），150.4（C-20），29.7（C-21），37.0（C-22），28.0（C-23），15.3（C-24），16.0（C-25），16.1（C-26），14.7（C-27），180.1（C-28），18.2（C-29），109.7（C-30）。上述数据与文献[11]报道的白桦脂酸数据基本一致，确定化合物3 为白桦脂酸。

化合物4： 白色晶体（丙酮），1H NMR（500 MHz，CDCl3）δ5.14（1H，t，J＝3.5 Hz，H-12），3.53（1H，q，J＝11.0 Hz，H-28），3.24（1H，dd，J＝11.0，5.0 Hz，H-3），3.19（1H，d，J＝11.0 Hz，H-28），1.10（3H，s，Me-27），1.00（3H，s，Me-26），0.98（3H，s，Me-25），0.96（3H，s，Me-23），0.94（3H，d，J＝6.0 Hz，Me-29），0.81（3H，d，J＝5.5 Hz，Me-30），0.79（3H，s，Me-24）；13C NMR（125 MHz，CDCl3）δ38.8（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），38.8（C-4），55.2（C-5），18.3（C-6），32.8（C-7），40.0（C-8），47.7（C-9），36.9（C-10），23.4（C-11），125.0（C-12），138.7（C-13），42.0（C-14），26.0（C-15），23.3（C-16），38.0（C-17），54.0（C-18），39.4（C-19），39.4（C-20），30.6（C-21），35.2（C-22），28.1（C-23），15.6（C-24），15.7（C-25），17.3（C-26），23.3（C-27），69.9（C-28），21.3（C-29），16.8（C-30）。以上数据与文献[12]报道的熊果醇数据基本一致，确定化合物4 为熊果醇。

化合物5：无色粉末，ESI-MSm/z：571 [M＋H]＋，593 [M＋Na]＋，569 [M-H]－；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ6.30（1H，d，J＝1.8 Hz，H-4'），6.25（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.22（2H，d，J＝1.8 Hz，H-2'和H-6'），6.19（1H，d，J＝1.8 Hz，H-4），5.25（1H，m，H-14'），2.88（2H，m，H-7），2.49（2H，m，H-7'），1.67～1.74（4H，m，H-8 和H-8'），1.39～1.60（26H，m，H-9～H-16 和H-9'～H-12'），1.33（2H，m，H-16'），1.31（2H，m，H-13'），0.88（2H，t，J＝7.2 Hz，H-17'），0.85（2H，t，J＝7.2 Hz，H-17）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ149.0（C-1），105.4（C-2），160.1（C-3），101.4（C-4），165.2（C-5），101.4（C-6），34.2（C-7），32.2（C-8），28.8～30.1（C-9～C-14 和C-9'～C-12'），31.9（C-15），22.7（C-16），13.9（C-17），171.7（C＝O），146.0（C-1'），110.8（C-2'和C-6'），156.6（C-3'和C-5'），108.0（C-4'），36.6（C-7'），30.8（C-8'），25.3（C-13'），75.8（C-14'），37.0（C-15'），18.8（C-16'），14.1（C-17'）。以上数据与文献[13-14]报道的8-（3，5-二羟基苯基）-1-丙基辛醇2，4-二羟基-6-十一烷基苯甲酸酯的数据基本一致，确定化合物5 为8-（3，5-二羟基苯基）-1-丙基辛醇2，4-二羟基-6-十一烷基苯甲酸酯。

化合物6：红色针晶；ESI-MSm/z：283 [MH]－；1H NMR（500 MHz，CDCl3）δ12.31（1H，s，OH），12.12（1H，s，OH），7.63（1H，s，4-H），7.37（1H，d，J＝2.5 Hz，5-H），7.08（1H，s，2-H），6.69（1H，d，J＝2.5 Hz，7-H），3.94（3H，s，OMe），2.45（3H，s，Ar-CH3）。13C NMR（125 MHz，CDCl3）δ165.2（C-1），124.5（C-2），148.4（C-3），121.3（C-4），133.2（C-4a），110.3（C-5），162.5（C-6），106.8（C-7），166.5（C-8），108.2（C-8a），190.8（C-9），113.7（C-9a），182.0（C-10），135.2（C-10a），56.1（OMe），22.2（Me）。以上数据与文献[15-16]报道的大黄素甲醚基本一致，确定化合物6 为大黄素甲醚。

化合物7：白色针状结晶；ESI-MSm/z433 [M＋Na]＋；在3 种不同展开溶剂（氯仿-乙酸乙酯＝4∶1，Rf值为0.5；正己烷-乙酸乙酯＝2∶1，Rf值为0.5；氯仿-甲醇＝40∶1，Rf值为0.7）系统中，其薄层色谱Rf值与对照品β-谷甾醇一致，确定化合物7 为β-谷甾醇。

化合物8：无色油状物；[R]20D＋11（c 0.03，CHCl3）；ESI-MSm/z261 [M＋Na]＋，237 [M-H]－；1H NMR（500 MHz，CDCl3）：δ6.82（1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.89（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），6.78（1H，dd，J＝8.0，1.5 Hz，H-6），4.11（1H，d，J＝10.0 Hz，H-7），2.84（1H，dq，J＝7.5，10.0 Hz，H-8），2.26（3H，s，H3-9'），0.77（3H，d，J＝6.5 Hz，H3-9），3.91（3H，s，OMe-3），3.10（3H，s，OMe-7）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ212.1（C-8'），146.9（C-3），145.6（C-4），131.2（C-1），121.2（C-6），113.9（C-5），108.9（C-2），86.3（C-7），56.5（OMe-3），56.0（OMe），53.5（C-8），29.9（C-9'），13.7（C-9）。以上数据与文献[17]报道的（＋）-（7S，8R）-4-羟基-3，7-二甲氧基-1'，2'，3'，4'，5'，6'，7'-降七碳木脂烷-8'-酮的数据基本一致，确定化合物8为（＋）-（7S，8R）-4-羟基-3，7-二甲氧基-1'，2'，3'，4'，5'，6'，7'-降七碳木脂烷-8'-酮。

化合物9：无色胶状物；（＋）-ESI-MSm/z245[M＋Na]＋；1H NMR（500 MHz，acetone-d6）δ7.05（1H，d，J＝15.1 Hz，H-7），6.44（1H，d，J＝15.1 Hz，H-8），5.89（1H，s，H-4），2.62（1H，d，J＝18.5 Hz，H-2a），2.10（1H，d，J＝18.5 Hz，H-2b），2.40（3H，s，H3-10），1.85（3H，s，H3-13），1.18（3H，s，H3-11），0.96（3H，s，H3-12）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ42.0（C-1），50.2（C-2），196.9（C-3），127.9（C-4），167.4（C-5），79.6（C-6），136.9（C-7），131.6（C-8），201.2（C-9），24.5（C-10），23.8（C-11），23.5（C-12），19.5（C-13）。以上数据与文献[18]中报道的（＋）-去氢催吐萝芙木醇数据基本一致，确定化合物9为（＋）-去氢催吐萝芙木醇。

化合物10：白色粉末，ESI-MS 223 [M＋H]＋，245 [M＋Na]＋；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ1.33（t，J＝7.2 Hz，3H，CH3），3.93（s，3H，ArOCH3），4.26（q，J＝7.2 Hz，2H，CH2），5.83（s，1H，ArOH），6.29（d，J＝16.2 Hz，1H，ArCH＝CH），6.92（d，J＝8.4 Hz，1H，6-ArH），7.08（dd，J＝8.4，1.8 Hz，1H，5-ArH），7.03（d，J＝1.8 Hz，1H，2-ArH），7.61（d，J＝16.2 Hz，ArCH＝CH）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ125.6（C-1），114.7（C-2），148.5（C-3），146.7（C-4），115.7（C-5），123.0（C-6），144.7（C-7），109.3（C-8），178.5（C-9），60.4（C-10），14.4（C-11），55.9（-OCH3）。以上数据与文献[19-20]报道的3-羟基-4-甲氧基苯丙烯酸乙酯的数据基本一致，确定化合物10 为3-羟基-4-甲氧基苯丙烯酸乙酯。

化合物11：白色粉末；ESI-MS 223 [M＋H]＋，245 [M＋Na]＋；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ1.33（t，J＝7.2 Hz，3H，CH3），3.93（s，3H，ArOCH3），4.26（q，J＝7.2 Hz，2H，CH2），5.83（s，1H，ArOH），6.29（d，J＝16.2 Hz，1H，ArCH＝CH），6.92（d，J＝8.4 Hz，1H，6-ArH），7.08（dd，J＝8.4，1.8 Hz，1H，5-ArH），7.03（d，J＝1.8 Hz，1H，2-ArH），7.61（d，J＝16.2 Hz，ArCH＝CH）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ127.1（C-1），115.7（C-2），147.9（C-3），146.7（C-4），114.7（C-5），123.0（C-6），144.6（C-7），109.3（C-8），168.0（C-9），60.3（C-10），55.9（-OCH3），14.4（C-11）。以上数据与文献[20-23]报道的4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸乙酯ethyl ferulate 的数据基本一致，确定化合物11 为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸乙酯。

化合物12：白色针晶（丙酮）；EIMS 176[M]＋；1H NMR（300 MHz，acetone-d6）δ7.58（1H，d，J＝9.0 Hz，H-4），7.26（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），7.22（1H，d，J＝8.4 Hz，H-6），6.60（1H，s，H-8），6.54（1H，d，J＝9.0 Hz，H-3），3.58（3H，s，OMe）。以上数据与文献[24]报道的7-甲氧基香豆素的数据基本一致，确定化合物12 为7-甲氧基香豆素。

化合物13：黄色无定形固体；（＋）-ESI-MSm/z223 [M＋H]＋，245 [M＋Na]＋；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ7.59（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），6.28（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），6.65（1H，s，H-8），3.94（3H，s，OMe-5），3.88（3H，s，OMe-7）。以上数据与文献[25]报道的5，7-二甲氧基-6-羟基香豆素的数据基本一致，确定化合物13 为5，7-二甲氧基-6-羟基香豆素。

化合物14：白色针晶（氯仿）；ESI-MSm/z197 [M-H]－；1H NMR（300 MHz，acetone-d6）δ7.37（2H，s，H-2，H-6），3.88（6H，s，OMe-2）。以上数据与文献[26]报道的4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲酸的数据基本一致，确定化合物14 为4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲酸。

化合物15：白色针状结晶（氯仿）；（-）-ESIMSm/z121 [M-H]－；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ12.40（1H，brs，COOH），8.14（2H，d，J＝7.5Hz，H-2，6），7.63（1H，m，H-4），7.49（2H，m，H-3，5）。以上数据与文献[27]报道的苯甲酸的数据基本一致，确定化合物15 为苯甲酸。

化合物16：白色无定型粉末；ESI-MSm/z123 [M＋H]＋，145 [M＋Na]＋，121 [M-H]－；1H NMR（500 MHz，CDCl3）δ9.88（1H，s，H-7），7.81（2H，d，J＝8.0 Hz，H-2，H-6），6.95（2H，d，J＝8.0 Hz，H-3，H-5）。以上数据与文献[28]报道的对羟基苯甲醛的数据基本一致，确定化合物16 为对羟基苯甲醛。

化合物17：白色无定型粉末；ESI-MSm/z139 [M＋H]＋，161 [M＋Na]＋；1H NMR（500 MHz，acetone-d6）δ8.08（1H，s，HO-6），7.03（2H，d，J＝8.0 Hz，H-2，H-6），6.73（2H，d，J＝8.0 Hz，H-3，H-5），3.66（2H，m，H-8），2.69（2H，t，J＝7.5 Hz，H-7），3.57（1H，m，HO-8）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ131.0（C-1），130.7（C-2，C-6），115.8（C-3，C-5），156.5（C-4），39.4（C-7），64.2（C-8）。以上数据与文献[29]报道的对羟基苯乙醇的数据基本一致，确定化合物17 为对羟基苯乙醇。

化合物18：白色针状结晶（丙酮）；ESI-MSm/z153 [M-H]－；1H NMR（300 MHz，acetone-d6）δ10.8（1H，s，COOH），9.19（2H，s，OH），7.52（1H，d，J＝1.2Hz，H-2），7.48（1H，dd，J＝8.1，1.2 Hz，H-6），6.89（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5）。以上数据与文献[30]报道3，4-二羟基苯甲酸的数据基本一致，确定化合物18 为3，4-二羟基苯甲酸。

化合物19：白色针状结晶（氯仿）；（－）-ESIMSm/z167 [M-H]－；1H NMR（300 MHz，acetone-d6）δ10.82（1H，brs，COOH），8.34（1H，brs，HO-3），7.59（1H，dd，J＝8.5，1.5 Hz，H-6），7.55（1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.90（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），3.90（3H，s，OCH3）；13C NMR（75 MHz，acetone-d6）δ124.8（C-1），115.5（C-2），148.0（C-3），152.0（C-4），113.4（C-5），122.8（C-6），167.4（C-7），56.3（OMe）。以上数据与文献[31]报道的3-羟基-4-甲氧基苯甲酸的数据基本一致，确定化合物19 为3-羟基-4-甲氧基苯甲酸。

各化合物的化学结构见图1。

图1 各化合物的结构Fig 1 Structure of compounds

4 生物活性测定

4.1 神经细胞保护活性筛选

PC12 细胞接种至多聚赖氨酸包被的96 孔板中，密度为每孔3.0×10 个。培养24 h 细胞贴壁后，换液，对照组加入含5%胎牛血清、5%马血清的高糖DMEM 培养基，模型组加入终浓度为150 µmol·L－1MPP＋的 DMEM 完全培养基，各给药组在MPP＋模型基础上加入终浓度为1.0×10－5mol·L－1的化合物1～19（用DMSO配制）；于37 ℃、CO2培养箱中培养48 h。每孔加入MTT（终浓度0.5 mg·mL－1）再培养4 h。酶标仪于570 nm 处测定吸光度（A）。细胞活力以相对保护率评价[32]。

相对保护率（%）＝[样品组的OD（光密度）值－模型组OD值]/[对照组的OD值－模型组的OD值]×100%

测定化合物1～19 对MPP＋诱导的PC12细胞损伤保护的影响，结果表明，在1.0×10－5mol·L－1下，化合物9 对MPP＋诱导的PC12 细胞损伤显示出一定的保护作用，其相对保护率为（76.60±10.67）%。与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

4.2 其他生物活性筛选

与此同时，对得到的单体化合物分别进行了抗氧化[33]、人肿瘤细胞毒（HCT28、Bel-7402、BGC-823、A549 和A2780 细胞株）[34]、肝细胞保护[35]和抗人类免疫缺陷病毒（HIV）（VsVG/HIV模型）[36]等生物活性筛选。在相同浓度下，所有化合物在药理模型筛选中均未显示明显活性。

5 讨论

本研究对樟科植物粗壮润楠中的化学成分及其生物活性进行探讨。首次从该科中分离得到α-芒柄花萜醇和8-（3，5-二羟基苯基）-1-丙基辛醇2，4-二羟基-6-十一烷基苯甲酸酯。并对分离得到的化合物进行生物活性筛选。在1.0×10－5mol·L－1下，（＋）-去氢催吐萝芙木醇（9）对MPP＋诱导的PC12 细胞损伤显示出一定的保护作用，其相对保护率为（76.60±10.67）%。下一步应通过更广泛的生物活性及其作用机制的深入研究，明确其药效物质基础及作用靶点，为后续临床应用及质量控制提供科学依据，促进民间习用药材粗壮润楠的药学研究及资源开发利用。