冯 淼，张吉斯，陈 华，马小晴

（鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁 鞍山 114007）

近几年随着我国经济的快速增长，护肤品消费也迅速崛起。2013 年中国超越日本成为世界第二大护肤品消费国，2017 年我国护肤品的市场规模已占到全球市场的11.5%，仅次于美国的18.5%[1]。护肤品中因含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素等成分，极利于微生物的生长和繁殖[2]，对使用者的健康有着严重的危害，护肤品质量安全也一直受到社会各界的关注，例如，聂炎炎等[3]对广东省化妆品微生物污染状况进行了调查；张静等[4]对化妆品微生物污染状况及防腐剂使用情况进行了分析；张剑等[5]调查了婴幼儿化妆品中重金属污染的情况等。相对于一次污染的研究来说，二次污染的研究更加复杂、繁琐，而且工作量巨大。开封后的护肤品由于使用方式、时间、温度等因素的影响更易造成二次污染，有研究表明[6-8]：护肤品在开封前合格率较高，使用过程中存在着二次污染的情况，随着使用时间的延长合格率逐渐降低。所以人们在如何避免微生物对护肤品质量产生影响、如何合理利用防腐剂建立安全体系，如何确保护肤品成分稳定等方面进行了深入的研究。护肤品作为一种持续使用的商品，不仅与出厂时的状况有关，也与消费者的使用习惯密切相关。在此，研究使用习惯对护肤品二次污染所产生的微生物情况，对人们科学合理地使用护肤品和降低护肤品研制成本都有重要意义。

1 材料与方法

1.1 样品来源

于鞍山某大型超市购买同一批次、成分较为简单的护肤品42 个。

1.2 主要试剂

SCDLP 液体培养基、双倍乳糖胆盐培养基、伊红美蓝琼脂培养基、靛基质试剂、十六烷三甲基溴化铵培养基、乙酰胺培养基、明胶培养基、硝酸盐蛋白质胨水培养基、营养琼脂、琼脂平板、甘露醇发酵培养基，均购自广东环凯微生物科技有限公司。革兰氏染色液试剂盒，北京陆桥技术股份有限公司；绿农菌素测定用培养基，南通凯恒生物科技发展有限公司；营养肉汤，上海博微生物科技有限公司；7.5%氯化钠肉汤，北京陆桥技术股份有限公司；Baird-Parker 氯化钠，国药集团化学试剂有限公司。

1.3 主要仪器

U-LH100HG 显微镜、SZX2-ILLT 荧光照相显微镜，奥林巴斯；LDZX-50KBS 高压灭菌锅，上海申安；超净工作台CJ-1S，天津泰斯特；赛多利斯电子天平；BSA224S、LC-162C 冰箱，海尔；恒温培养箱LBI-400，上海龙跃。

1.4 实验方法

1.4.1 存放温度

取15 份护肤品，每天早晚各由3 名实验员用塑料棒取用。每次使用后，将中盖和外盖都封紧，然后将护肤品分别在-4、5、15、25、35 ℃的条件下存放。分别在30、60、90 d 检测护肤品中菌落总数、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.2 取用方法

取9 份护肤品，每天早晚各由3 名实验员用手指、化妆棉签及塑料棒各取用。每次使用后，将中盖和外盖都封紧，在常温存放。分别在30、60、90 d，检测护肤品中菌落总数、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.3 密封程度

取9 份护肤品，每天早晚各由3 名实验员用塑料棒取用，并且每次使用后，一个将中盖和外盖都封紧，一个只盖外盖并保证封紧，一个只盖外盖并保持松弛不掉的状态，然后保存在常温的条件下。分别在30、60、90 d，检测护肤品中菌落总数、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.4 使用时间

取9 份护肤品，每天早中晚用塑料棒取用，第一份持续使用30 d，第二份持续使用60 d，第三份持续使用90 d。每次使用后，将中盖和外盖都封紧，在常温存放。分别在30、60、90 d，检测护肤品中菌落总数、霉菌和酵母菌的含量。

1.5 检测方法及评价标准

按照GB 7918.1—2018《化妆品卫生标准》和《化妆品安全技术规范》（2015 版）执行。检测项目包括：菌落总数、霉菌和酵母菌的含量。菌落总数不得＞1 000 CFU/mL（g）；霉菌和酵母菌总数不得＞100 CFU/mL（g）；有一项不符合以上标准的产品为不合格产品。

2 结果及讨论

2.1 存放温度对护肤品中微生物二次污染的影响

不同存放温度下检测结果见表1。经检测发现，将护肤品保存在不同的温度条件下，菌落总数、霉菌和酵母菌的含量都符合国家标准。在相同温度条件下，使用时间越长，菌落总数也就越多。将护肤品保存在-4 ℃的冰箱中，护肤品受微生物二次污染的影响最小，但是在常温（25 ℃）条件下，菌落总数增加了53 CFU/g～223 CFU/g，霉菌及酵母菌增加了0 CFU/g～1 CFU/g，影响结果相对较小，因此综合考虑护肤品可以放在常温中使用。

表1 存放温度对护肤品中微生物二次污染的影响 CFU/g

2.2 取用方法对护肤品中微生物二次污染的影响

不同取用方法检测结果见表2。经检测发现，在手指和塑料棒取用护肤品的条件下，菌落总数、霉菌和酵母菌的含量都符合国家标准。而未经消毒灭菌的化妆棉签内部可能隐藏大量微生物，用其取用护肤品，可能将微生物引入护肤品内，造成二次污染。用塑料棒的方式取护肤品，可使护肤品的菌落总数、霉菌和酵母菌受影响最小。

表2 取用方法对护肤品中微生物二次污染的影响 CFU/g

2.3 密封程度对护肤品中微生物二次污染的影响

不同密封程度检测结果见表3。经检测发现，密封程度对护肤品中微生物二次污染的影响相对较小，菌落总数、霉菌和酵母菌的含量都符合国家标准，但是外盖封紧会明显减少菌落总数，所以建议使用者在使用过程中将瓶盖封禁，以防止微生物的二次污染。

表3 密封程度对护肤品中微生物二次污染的影响 CFU/g

2.4 使用时间对护肤品中微生物二次污染的影响

不同使用时间检测结果见表4。经检测发现，连续使用30、60、90 d 的护肤品在开封后的90 d 内，菌落总数、霉菌和酵母菌的含量都符合国家标准，但是随着使用时间的延长，护肤品内微生物总数还是会增多，所以建议使用者打开化妆品后尽量缩短使用时间。

表4 使用时间对护肤品中微生物二次污染的影响 CFU/g

3 结语

护肤品已经成为每位爱美人士不可或缺的生活用品，护肤品在改善和提高人们的生活质量方面起着不容小视的作用，护肤品中的微生物是否会对使用者的健康带来危害关系着人们的使用安全和身体健康。对于护肤品来说，无论是取用习惯、购买习惯、存放习惯还是使用时间都会对其产生二次污染。虽然这些习惯是使用者在使用过程中微不足道的一个小举措，但经多次重复后，这些习惯就会给护肤品带来二次污染，为以后的使用埋下隐患，最终对使用者的健康带来威胁。我们无法改变护肤品持续性的特性，但我们可以通过科学的研究，来探索使用习惯对护肤品中微生物的影响，以此来降低使用习惯对化妆品的二次污染，让使用者能更科学、更健康、更放心的使用护肤品[9-11]。